Метод негативного контрастирования

Присоединение атомов тяжелых металлов к структурным компонентам объекта называется позитивным окрашиванием, так как при этом красится сам объект. Однако если биологический объект погружен в электроноплотное вещество, которое не окрашивает его, а создает вокруг него темный фон, то говорят о негативном окрашивании, или негативном контрастировании. Плотное вещество может также проникать в промежутки между структурными компонентами объекта или ложиться на его наружную поверхность, способствуя таким образом, контрастному выявлению деталей его поверхности. Этот метод был разработан Бреннером и Хорне в 1959г.

Особо широкое распространение для окрашивания по методу негативного контрастирования получил фосфорновольфрамовый натрий. Суспензия исследуемого материала готовится обычно в 1%-ном растворе фосфорновольфрамового натрия, затем суспензия из пульверизатора, либо с помощью микропипетки наносится на поверхность сетки, покрытой коллодием или формваром. Сетки высыхают почти мгновенно, и образуется тонкая пленка красителя, заключающая в себе объект.

Разрешение при негативном окрашивании выше, чем разрешение, получаемое на ультратонких срезах. Предел его составляет около 12 Å и определяется размером частиц высушенного красителя.

III. Метод культуры клеток.

История метода.

Культура клеток - метод длительного сохранения в живом состоянии клеток, тканей. Первые успешные опыты по культуре ткани осуществил в 1907 американский учёный Р. Гаррисон, поместив в каплю лимфы кусочек зачатка нервной системы зародыша лягушки. Клетки зачатка оставались живыми несколько недель, из них вырастали нервные волокна. Первая культура фибробластов была получена в 1943г. – это L-клетки. Из карциномы шейки матки в 1953г. была получена культура Hela.