2015-06-26
530
1 этап.
Ориентировочная сорбция субстрата на активном центре фермента с образованием обратимого фермент-субстратного комплекса. На этом этапе происходит взаимодействие адсорбционного центра фермента с молекулой субстрата. При этом и субстрат подвергается конформационной перестройке. Кинетическая характеристика 1-го этапа ферментативного катализа - константа Михаэлиса (Км).
2 этап.
Химические превращения молекулы субстрата в составе фермент-субстратного комплекса с образованием комплекса фермента с химически преобразованным субстратом. На этом этапе разрываются одни ковалентные связи и возникают новые. Поэтому этот этап протекает значительно медленнее, чем 1-й и 3-й этапы. Именно скорость второго этапа определяет скорость всей ферментативной реакции в целом. Кинетическая характеристика 2-го этапа - максимальная скорость (Vmax).
3 этап.
Десорбция готового продукта из его комплекса с ферментом. Этот этап протекает легче, чем 2-й. Он, как и 2-й этап, тоже необратим. Исключение - обратимые ферментативные реакции.
· Фермент сахараза относится к классу гидролаз. Фермент сахараза катализирует реакцию гидролитического расщепления дисахарида сахарозы с образованием глюкозы и фруктозы. Наличие конечного продукта реакции – глюкозы определяют с помощью реакции Троммера.
Ход работы. В 2 пробирки наливают по 1 мл раствора сахаразы (вытяжки из дрожжей). В 1-й пробирке раствор кипятят в течение 2-х минут, во 2-й - оставляют без кипячения. Затем в обе пробирки добавляют по 2 мл сахарозы, перемешивают, оставляют при 37ºС. Через 10 минут с содержимым пробирки проводят качественную реакцию на глюкозу – реакцию Троммера. Под действием сахаразы в растворе появится глюкоза и фруктоза. Полученные результаты объясняют и делают вывод о зависимости активности фермента от температуры.
· (ниже)
