Изучение кинетики ферментативных реакций

Цель работы: изучение кинетики ферментативных реакций.

Кинетика ферментативных реакций — это раздел энзимологии, который изучает зависимость скорости реакций, катализируемых ферментами, от хими­ческой природы реагирующих веществ (т.е. субстратов и ферментов) и от усло­вий их взаимодействия, т.е. температуры, концентрации компонентов, pH сре­ды, состава среды, присутствия модификаторов и т.д.

Изучение кинетически ферментативных реакций показывает не только их отличия от небиологических катализаторов, обусловленные прежде всего белковой природой ферментов, но и многообразие условий, от которых зависит правильное определение активности любого фермента.

Скорость реакции, т.е. убыль субстрата или прирост количества продук­та за определенные промежутки времени, является мерой каталитической ак­тивности фермента или просто активностью фермента.

Использование методов качественного анализа субстратов и продуктов реакции позволяет выявить присутствие фермента в биологическом материале, а количественное определение их дает возможность определить содержание фермента или его активности в расчете на единицу массы или объема иссле­дуемого образца.

Реактивы: 1%-ный свежеприготовленный раствор крахмала; раствор йода в иодиде калия; фосфатно-цитратный буфер 0,1 М с pH 5,6; 6,4; 6,8; 7,2 и 8,0.

Оборудование: штатив с пробирками; водяная баня; лабораторный тер­мометр; пипетки вместимостью 1 и 5 мл; бюретка вместимостью 25 мл; хими­ческие стаканы (для льда и снега).

Материал для исследования: разбавленная слюна. Для ее получения промывают рот водой от остатков пищи. Набирают в рот порцию дистиллиро­ванной воды около 20 мл и держат ее примерно 2 мин, смешивая языкомслюной. Жидкость со слюной выпускают в стаканчик и профильтровывают че­рез вату в пробирку. Фильтрат используют для работы.

Зависимость скорости реакции от количества фермента

Метод основан на определении скорости гидролиза крахмала, выявляе­мого пробой с йодом, в зависимости от количества добавленной а-амилазы слюны.