Каталаза

H₂O₂ + H₂O₂ O₂ + 2H₂O

Биологическая роль каталазы состоит в том, что она разлагает избыток пероксида водорода, который образуется в клетках в результате окислительно-восстановительных реакций. Температурный оптимум действия каталазы 0 ⁰С.

За одну минуту одна молекула каталазы расщепляет 5_*10⁶ молекул H₂O₂ на O₂ и H₂O.

Оборудование и реактивы:

Пробирки; пероксид водорода (1%-й раствор, свежеприготовленный); раствор каталазы.

Порядок выполнения работы:

В две пробирки наливают по 1 мл 1%-го раствора пероксида водорода. В первую пробирку добавляют 2-3 капли раствора каталазы, во вторую - 2-3 капли прокипяченного раствора каталазы (при высокой температуре фермент инактивируется). В пробирке с активным ферментом наблюдается выделение водорода, во второй пробирке с инактивированным энзимом изменений нет.

Качественная реакция на фенолоксидазу (фенолазу):

Фенолоксидазы (фенолазы) - ферменты, катализирующие окисление фенолов и полифенолов с участием кислорода как акцептора водорода. Фенолаза - хромопротеид, содержащий медь. Фенолаза является ферментом растительных тканей, особенно характерна для картофеля. При действии фенолоксидазы на пирокатехин (полифенол) образуется ортобензохинон - продук окисления синего цвета:

OH Фенолаза = O

+ O + H₂O

OH = O

Пирокатехин Ортобензохинон

Оборудование, реактивы:

Пирокатехин; смола, содержащая пирокатехин; картофель.

Порядок выполнения работы:

На разрез сырого или вареного картофеля нанести 1-2 капли раствора пирокатехина или гваяковой смолы, содержащей пирокатехин. Наблюдается появление синей окраски.

3. Обнаружение цитохромоксидазы в мышечной ткани:

Цитохромоксидаза (а₃) - компонент дыхательной цепи. Является геминовым дыхательным ферментом. Белковый компонент цитохромоксидазы содержит медь.

Для обнаружения цитохромоксидазы используют реакцию окисления аминов и фенолов (парафенилендиамина, гидрохинона, диметилпарафенилендиамина) кислородом в присутствии данного фермента.

Реактив «Нади» (щелочной раствор a-нафтола и диметилпарафенилендиамина) легко окисляется с образованием индофенолового голубого:

CH₃

N O₂, цитохромоксидаза

NH₂ + - H₂O

CH₃ OH

Диметилпарафенилендиамин

a-нафтол

CH₃

N N

CH₃

= O

Индофеноловый голубой

Оборудование, реактивы:

Пипетки; колбы; воронки; марля; фильтры бумажные; баня водяная; пробирки; реактив «Нади».

Название «Нади» образовано из первых двух букв слов - нафтол, диамин.

Реактив «Нади» - смесь 1%-го раствора a-нафтола и 1%-го раствора парафенилендиамина.

Порядок выполнения работы:

На фильтровальную бумагу помещают 50 г измельченной мышечной ткани и добавляют 1-2 капли реактива «Нади». Через 3-5 мин в результате образования индофенолового голубого появляется синее или зеленовато-синее окрашивание.