Активности липазы

Липаза относится к липолитическим ферментам, является гидролазой, катализирует липолиз. Липолиз - гидролиз жиров на глицерин и жирные кислоты.

CH2 – O – CO – R₁ CH₂ - OH

| липаза |

CH – O – CO – R₂ + 3H₂O CH – OH + R₁COOH +

| |

CH₂ – O – CO – R₃ CH₂ - OH

+ R₂COOH + R₃COOH

К пищеварительным липолитическим ферментам относятся липаза желудка,

Которая катализирует гидролиз жиров молока, и липаза тонкого кишечника. Основной гидролиз жиров присходит именно в тонком кишечнике. Активатором липазы являются желчные кислоты, оптимум рН для фермента - 7…8.

Тканевая липаза контролирует гидролиз тканевых жиров, участвует в автолизе жировой ткани. Тканевые липазы активны при низких температурах.

Для определения липолитической активности липазы используют метод количественного определения свободных жирных кислот, образующихся в в результате гидролиза нейтральных жиров. Жирные кислоты оттитровывают щелочью и по объему щелочи, идущей на титрование жирных кислот, определяют активность липазы.

Оборудование, реактивы:

Установка для титрования; термостат; молоко; липаза; гидроксид натрия (0,1 и 0,01 н растворы); фенолфталеин.

Порядок выполнения работы:

В колбу вносят 50 мл молока, прибавляют 3-5 капель фенолфталеина, нейтрализуют 0,1 н раствором NaOH до слегка розового окрашивания.

Реакционную смесь выдерживают в термостате при температуре 37…40 ⁰С в течение 5 мин. Затем добавляют 3 мл

раствора липазы, перемешивают, замечают начальное время. Сразу в начале гидролиза отбирают 5 мл смеси, титруют 0,01 н раствором NaOH, последующие пробы по 5 мл для титрования отбирают через 5, 15, 30, 60, 120 мин.

На основании полученных результатов строят зависимость n(NaOH)= t.