Реакция агглютинации (РА)

Агглютинация (от лат. agglutinacio-склеивание) - склеивание (соединение) антигеннесущих корпускулярных частиц молекулами специфических антител в присутствии электролитов, которое заканчивается образованием видимых невооруженным глазом хлопьев или осадка (агглютината). Различают реакцию агглютинации прямую -при которой во взаимодействие со специфическими антителами непосредственно участвуют собственные антигены бактериальной или другой клетки, например эритроцитов, и непрямую, или пассивную, при которой бактериальные клетки или эритроциты являются носителями не собственных, а сорбированных на них чужих антигенов(или антител) для выявления специфических к ним антител (или антигенов).Реакцию агглютинации ставят на стеклянных пластинках или пробирках. Для постановки реакции вносят в лунки (пробирки) вносят разведенную 0,85% -ным раствором NaCl сыворотку и равный объем суспензии стандартного диагностикума. Учет результатов реакции агглютинации проводят через 2 часа инкубации при 37 градусах. Оценку осуществляют по четырехкрестной системе. Реакция обязательно сопровождается контролем сыворотки и контролем антигена.

Классическая реакция агглютинации предусматривает использование корпускулярных антигенов. Однако в ней могут участвовать и растворимые антигены. Чтобы это стало возможным, такие антигены адсорбируют на иммунологически инертных частицах. В качестве носителя наиболее часто применяют в настоящее время эритроциты человека или животных. Эритроциты, адсорбировавшие на себе антиген, называются сенсибилизированныными данным антигеном, а иммунная реакция, в которой они участвуют - реакцией непрямой или пассивной гемагглютинации (РНГА или РПГА), так как эритроциты участвуют в ней пассивно.

РПГА ставится в специальных полистироловых пластинах с луночками с полусферическим дном. При использовании реакции для серологической диагностики готовят двукратные разведения в физрастворе исследуемой сыворотки и затем добавляют к ней в качестве диагностикума взвесь сенсибилизируемых эритроцитов. Учет через 2 часа после инкубации при 37 град. по 4-х крестной системе. При положительной реакции агглютинировавшие эритроциты оседают на дно луночки и равномерно покрывают его в виде перевернутого зонтика. При отрицательной реакции эритроциты тоже оседают, осадок выглядит в виде маленького "диска " в центре луночки. Титром сыворотки в РПГА является последнее ее разведение, которое дает еще ярко выраженную геммагглютинацию без значительных признаков наличия " диска".

РПГА может применяться также в качестве ускоренного метода диагностики для обнаружения в исследуемом материале неизвестных бактерий, вирусов. При таком варианте постановки в роли известного компонента реакции используют эритроциты адсорбировавшие известные по своей специфичности антитела- антительный эритроцитарный диагностикум. Если исследуемый материал содержит достаточное количество антиген, РПГА будет положительная.

Вариантами использования РПГА являются реакция нейтрализации антигена (РНАг), реакция нейтрализации антител (РНАт), реакция торможения пассивной геммагглютинации (РТПГА). Для этих реакций используют антигенные и антительные эритроцитарные диагностикумы.