Метод электрофоретического разделения на пленках целлюлозы

Принцип метода: коллоидные частицы белка перемещаются в электрическом поле постоянного тока: в щелочной среде - к аноду, в кислой среде - к катоду. В щелочной среде в электрическом поле наиболее быстро перемещаются альбумины, затем α1-глобулины, α2-глобулины и γ-глобулины.

Реактивы:

1. 5,5 Диэтилбарбитуровой кислоты натриевая соль (мединал).

2. Лимонная кислота.

3. Барбитал- цитратный буфер рН 8,6: 7,36 г диэтилбарбитурата натрия, 0,3 г лимонной кислоты растворяют в 700 мл воды в мерной колбе вместимостью 1 л, проверяют рН и доводят водой до метки.

4. Бромфеноловый синий водорастворимый, индикатор.

5. Уксусная кислота ледяная.

6. Трихлоруксусная кислота (5%-ный раствор).

7. Раствор для окрашивания: 0,5 г бромфенолого синего и 20 мл ледяной уксусной кислоте довести до 1 литра водой.

8. Отмывающий раствор – уксусная кислота, (5%-ный раствор).

Ход определения: Смочить пленки из ацетата целлюлозы буферным раствором 5 минут. Удалить избыток влаги. Фильтровальной бумагой. Поместить пленки в камеру, закрыть камеру крышкой и пропустить ток напряжением 150В в течение 5 минут, после чего выключают ток. Нанести 1-4 мкл сыворотки крови узкой полосой на катодный край пленки. Провести электрофоретическое разделение сыворотки крови при напряжении 150 В и силе тока 1 мА на 1 см поперечного сечения полоски в течение 20 минут. Затем достать пленки, высушить в течение 5-10 минут в сушильном шкафу при температуре 100°С в течение 10 минут. Окрашивание проводят красителем в течение 15 минут. Избыток красителя отмывают 5%-ным раствором уксусной кислоты до исчезновения фона.