Исследование сиаловых кислот

Принцип метода: При нагревании гликопротеидов плазмы с трихлоруксусной кислотой отщепляются сиаловые кислоты, которые гидролизуются с образованием свободной нейраминовой кислоты и уксусной кислоты. Резорцин в присутствии солей меди дает с нейраминовой кислотой синее окрашивание.

Реактивы:

1. Меди сульфат, 0,1 моль / л: растворяют 624 мг сульфата меди CuSO₄ х 5Н₂О в 25 мл воды.

2. Резорцин 2 г/л. Резорциновый реактив готовят, растворяя 200 мг резорцина в 10 мл воды, затем добавляют концентрированной НСI и 0,25 мл раствора сульфата меди, после смешивания общий объем доводят до 100 мл водой.

3. Экстрагирующий реактив: смешивают 85 мл бутилацетата и 15 мл бутилового спирта.

4. Трихлоруксусная кислота, 50 г/л (ТХУ).

5. Калибровочные растворы. Основной раствор содержит 0,5 мг кристаллической ацетилнейраминовой кислоты в 1 мл воды. Из него готовят калибровочные растворы. В пять пробирок добавляют по: 0,1 мл; 0,2 мл; 0,3 мл; 0,4 мл; 0,5 мл основного раствора, доводят объем каждой пробирки до 1мл водой. Содержание нейраминовой кислоты соответствует с первой по пятую пробирки: 50 мкг/мл; 100 мкг/мл; 150 мкг/мл; 200 мкг/мл; 25 мкг/мл.

Ход определения: К 1 мл плазмы или сыворотки приливают 1,9 мл раствора ТХУ, ставят на 7 минут в кипящую водяную баню для гидролиза, затем охлаждают и фильтруют через бумажный фильтр. К 0,5 мл прозрачного фильтрата добавляют 0,5 мл воды и 1 мл резорцинового реактива, ставят на водяную кипящую баню на 15 минут. После этого охлаждают, добавляют 3 мл экстрагирующего реактива, встряхивают и оставляют на 15 минут для расслоения фаз. Окраска переходит в верхний слой, который берут для фотометрии, которую проводят на ФЭК при длине волны 575-590 нм в кювете на 0,5 см против холостого опыта, при постановке которого к 1 мл воды добавляют 1 мл резорцинового реактива. Остальные процедуры те же, что и в основном опыте. Для построения калибровочного графика берут по 1 мл калибровочных растворов, добавляют по 1 мл резорцинового реактива и обрабатывают так же, как в основном опыте.

Расчет проводят по калибровочному графику.

Нормальные величины. Содержание сиаловых кислот составляет 2,0-2,3 ммоль/л или 620-730 мг/л.

Содержание сиаловых кислот возрастает при самых разнообразных воспалительных процессах, а также при опухолях, инфаркте миокарда.