Первинний калюс, що утворився на експлантатах через 4-6 тижнів, переносять на свіже живильне середовище - перевивають (субкультивують). Розмір трансплантата при культивуванні на агаровому середовищі коливається від 60 до 100 мг маси тканини на 30-40 мл живильного середовища.
Мета роботи: наростити калюсну тканину і отримати перевивну культуру.
Матеріали і обладнання: чашки Петрі з експлантатами, на яких утворився калюс, чашки Петрі зі стерильним середовищем для калюсу (табл. 8), пінцети, скальпелі, стерильні чашки Петрі, спирт, спиртівка, ламінар-бокс, парафілм.
ХІД РОБОТИ
1. Експлантат з первинним калюсом перенести у стерильну чашку Петрі.
2. Притримуючи експлантат пінцетом, скальпелем зрізати калюс.
3. Скальпелем поділити калюсну тканину на рівні фрагменти, які перенести на свіже живильне середовище.
4. Підписати чашку Петрі і закрити парафілмом.
5. Чашки культивувати у термостаті при 250 + 10С.
6. Через 4-6 тижнів від нарослої калюсної тканини відділити шматочки агарового середовища, а калюс розділити на рівні фрагменти, які перенести на свіже живильне середовище для калюсу.
Для підтримання калюсної культури дану операцію необхідно проводити кожні 4-6 тижнів.
Період субкультивування встановлюють для кожної культури експериментально.
Робота 11. Дослідження впливу співвідношення ауксин:цитокінін у живильному