2015-09-06
154
Мета роботи: підібрати оптимальні умови стерилізації апікальних меристем суниці, отримати стерильну культуру суниці.
Матеріали і обладнання: рослини суниці, мильний розчин, концентрований розчин “Білизни”, стаканчики для стерилізуючих розчинів, мірний циліндр, стерильна дистильована вода, пробірки з живильним середовищем МС з додаванням 0,8 мг/л БАП, чашки Петрі зі стерильним фільтрувальним папером, стерильні чашки Петрі, нейлон, пінцети, очні пінцети, скальпелі, очні скальпелі, леза, препарувальні голки, спиртівка, спирт, бінокулярний мікроскоп, ламінар-бокс.
ХІД РОБОТИ
1. Приготувати розчини “Білизни” різної концентрації (робота 4).
2. З вусиків суниці зрізати верхівки довжиною 1,5-2 см.
3. Експлантати промити проточною, а потім мильною водою.
4. Очистити бруньки від покривних листків і лусок і загорнути у нейлонові мішечки по 10 штук у кожний.
5.Мішечки з рослинним матеріалом помістити у стаканчики з стерилізуючими розчинами відповідної концентрації на відповідний час (табл. 11).
6. Промити рослинний матеріал у трьох порціях стерильної дистильованої води (по 5 хв у кожній порції).
7. Стерильним пінцетом перенести один мішечок до стерильної чашки Петрі. Акуратно його розгорнути пінцетами.
Таблиця 11
| № п/п | Концентра-ція “Білизни” | Тривалість стерилізації (хв) | Загальна кількість експланта-тів (штук) | Кількість асептичних експлантатів через 6 днів | Кількість рослин-регенеран-тів через 30 днів | |
| штук | % | |||||
| 1:4 | ||||||
| 1:3 | ||||||
| 1:2 | ||||||
| 1:1 |
8. Стерильним пінцетом перенести один експлантат у стерильну чашку Петрі, яка встановлена на столику бінокулярного мікроскопа, який попередньо стерилізувався УФ променями у ламінар-боксі.
9. Під бінокулярним мікроскопом, притримуючи верхівку пагона очним пінцетом, очним скальпелем відділити покривні листки і листкові примордії. Меристему з одним-двома листковими примордіями і субапікальною тканиною відділити стерильним лезом. Цю операцію проводять із кожним експлантатом.
10. Ізольовану меристему стерильним пінцетом перенести на живильне середовище.
11. Пробірки з рослинним матеріалом культивувати при температурі 23-260С, освітленні 2-3клк, 16-годинному фотоперіоді, відносній вологості 70-75%.
12. Через 4-6 днів перевірити стерильність рослинного матеріалу. Через 25-30 днів мають вирости рослинки суниці.
Результати представити у таблиці 11.
Як рослинний матеріал у даній роботі можна використовувати пагони смородини, гвоздики, гербери, троянди, хризантеми, антуріума та інших рослин.
КАЛЮСНА КУЛЬТУРА
