Робота 17. Непрямий ембріогенез

Мета роботи: отримати соматичні ембріоїди шляхом непрямого ембріогенезу і проростити з них рослини моркви.

Матеріали і обладнання: рослини моркви, вирощені in vitro, чашки Петрі з середовищем МКР-4 (табл. 15), чашки Петрі з середовищем МКР-5 (табл. 15), баночки з середовищем МС, стерильні чашки Петрі, скальпелі, пінцети, спирт, спиртівка, парафілм, ламінар-бокс.

ХІД РОБОТИ

Отримання рослин шляхом непрямого ембріогенезу передбачає послідовну зміну відповідних стадій культивування:

1. Індукція проембріогенної калюсної маси.

2. Розвиток ембріоїдів.

3. Проростання ембріоїдів і формування рослин.

Тому робота складається з кількох етапів, які відповідають стадіям культивування.

Етап 1. Індукція проембріогенної калюсної маси.

1. Стерильним пінцетом витягти рослину із пробірки і помістити її у стерильну чашку Петрі.

2. Притримуючи рослину пінцетом, скальпелем відрізати листки моркви і розрізати черешки листків на сегменти довжиною близько 1 см.

3. Рослинні експлантати помістити у чашки Петрі з калюсогенним середовищем МКР-4.

4. Закрити чашки парафілмом і підписати.

5. Чашки з рослинним матеріалом культивувати у термостаті при температурі 27⁰С протягом 1-2 місяців.

Етап 2. Розвиток ембріоїдів.

1. Експлантат з калюсом помістити у стерильну чашку Петрі.

2. Скальпелем відділити калюс від експлантата і поділити на рівні фрагменти.

3. Шматочки калюсу перенести на свіже живильне середовище МКР-5.

4. Чашки закрити і підписати.

5. Чашки з калюсом культивувати у термостаті при 27⁰С.

6. Один раз на місяць необхідно пересаджувати калюсну тканину на свіже живильне середовище.

При вирощуванні в цих умовах через 4-6 тижнів починається формування ембріоїдів.

Етап 3. Пророщування ембріоїдів і формування рослин.

1. Через 8-10 тижнів калюс з ембріоїдами перенести у стерильну чашку Петрі.

2. Скальпелем відокремити зрілий ембріоїд від калюсної маси і помістити на агарове безгормональне середовище МС.

У баночку поміщають по 3 ембріоїди.

3. Банки з рослинним матеріалом культивувати при 28⁰С і 16-годинниму фотоперіоді.

4. За цих умов вирощування через 6-8 тижнів із соматичних ембріоїдів виростуть рослини

Культура ізольованих протопластів вищих рослин