Зависимость скорости ферментативной реакции от температуры

Принцип метода. Метод основан на определении скорости гидролиза альфа-амилазой слюны крахмала в зависимости от температуры.

Ход определения. В пробирку помещают 5 капель слюны, кипятят 1-2 минуты на водяной бане и остужают. В две другие помещают по 5 капель некипяченой слюны.

Вносят во все пробы по 10 капель раствора крахмала и ставят первую и вторую пробирки в водяную баню при 38^оС, а третью - в воду со льдом или снегом на 3 мин. Затем прибавляют в каждую пробирку по 1 капле раствора йода в йодиде калия и сравнивают развивающуюся окраску.

Оформление работы. Данные оформляют в виде таблицы. Сделать вывод о зависимости скорости ферментативной реакции от температуры и причинах этой зависимости.

Фермент	Субстрат	Окрашивание с йодом	Температура

ЛАБОРАТОРНЫЕ РАБОТЫ ДЛЯ ВЫПОЛНЕНИЯ

НА ПРАКТИЧЕСКИХ ЗАНЯТИЯХ

Раздел I. Химия белков. Ферменты.

Тема 1.5. Ингибиторы и активаторы ферментов.

Регуляция активности ферментов.

Активаторы и ингибиторы альфа-амилазы слюны

Метод основан на сравнении скорости гидролиза крахмала (продукт гидролиза крахмала обнаруживают пробой с йодом) под действием альфа-амилазы слюны до и после добавления фенилтиомочевины, ионов Сl^- и Сu²⁺.

Ход определения. Берут 4 пробирки наливают по 10 капель: в первую-дистиллированной воды, во вторую-раствора хлорида натрия, а в третью-раствора сульфата меди и в четвертую – раствора фенилтиомочевины, а затем по 20 капель раствора крахмала и по 1 капле разведенной слюны. Содержимое перемешивают встряхиванием, помещают пробирки в водяную баню при 38^оС и засекают время начала инкубации.

Через каждые 1-2 минуты из проб отбирают в другие пробирки по 1 капле жидкости и добавляют 1 каплю раствора йода в йодиде калия. Отмечают время появления красного окрашивания (стадия образования эритродекстринов) при проведении реакции с йодом в каждой из пробирок.

Оформление работы. Результаты занести в таблицу и сделать вывод о действии изученных веществ.

Фермент	Модификатор активности	Фермент	Время образования эритродекстринов, мин (проба с йодом)

ЛАБОРАТОРНЫЕ РАБОТЫ ДЛЯ ВЫПОЛНЕНИЯ

НА ПРАКТИЧЕСКИХ ЗАНЯТИЯХ

Раздел II. Биоэнергетика. Обмен углеводов.

Тема 2.1. Биологическое окисление. Окислительное фосфорилирование.