Количественное определение каталазы

Ход определения. Разведенную кровь (1:1000) взбалтывают, наливают по 1 мл в две колбы (или в два стаканчика), приливают 7 мл дистиллированной воды; в опытную пробу добавляют 2 мл 1% раствора перекиси водорода, в контрольную – 5 мл 10% раствора серной кислоты. Действие каталазы в кислой среде (контрольная проба) прекращается, так как она действует при pH=7,4. Колбы оставляют в комнатной температуре на 30 минут. Затем приливают в опытную пробу 5 мл 10% раствора серной кислоты, а в контрольную – 2 мл 1% раствора перекиси водорода. Содержимое каждой колбы титруют 0,1н раствора перманганата калия до появления розовой окраски. Рассчитывают каталазное число (КЧ) по формуле: КЧ = (А-В) × 1,7,где А – количество 0,1н раствора перманганата калия, пошедшее на титрование контрольной пробы, мл; В – количество 0,1н раствора перманганата калия, пошедшее на титрование опытной работы, мл. На титрование контрольной пробы, где каталаза разрушена, пойдет больше раствора перманганата калия, чем на титрование опытной пробы. Полученную разность умножают на 1,7 и получают каталазное число для исследуемой пробы. В норме КЧ колеблется от 10 до 15 единиц.

Клинико-диагностическое значение. Определение активности каталазы имеет значение для диагностики рака, анемии, туберкулеза. При этих заболеваниях содержание каталазы в крови снижается.

ЛАБОРАТОРНЫЕ РАБОТЫ ДЛЯ ВЫПОЛНЕНИЯ

НА ПРАКТИЧЕСКИХ ЗАНЯТИЯХ

Раздел II. Биоэнергетика. Обмен углеводов.

Тема 2.4. Глюконеогенез. Гликогенолиз. Гликогенез.