Тема 1.4. Кинетика ферментативных реакций

Специфичность действия амилазы (α-1,4-глюкан-4-глюкангидролаза) и сахаразы (β-D-фруктофуранозид-фруктогидролаза)

Принцип метода. Метод основанна сравнительном изучении гидролиза α-амилазой и сахаразой разных субстратов, содержащих глюкозидные связи: крахмала и сахарозы. Гидролиз крахмала и сахарозы оценивают пробой Фелинга на восстанавливающие сахара (мальтоза, глюкоза).

Ферменты катализируют реакции по схеме:

α-амилаза

Крахмал + nH₂O → Декстрины + Мальтоза

сахараза

Сахароза + H₂O → Глюкоза + Фруктоза

Ход определения. В одну пробирку вносят 10 капель раствора крахмала, в другую – такой же объем раствора сахарозы. Для выявления специфичности α-амилазы в обе пробы добавляют по 5 капель разбавленной слюны, перемешивают встряхиванием и ставят в водяную баню при 38˚С на 10 мин. Затем с жидкостью в обеих пробирках проделывают пробу с реактивом Фелинга и сравнивают окраску.

Для выявления специфичности сахаразы в одну пробирку наливают 10 капель раствора крахмала, а в другую – сахарозы и прибавляют к ним по 5 капель экстракта сахаразы дрожжей. Пробы перемешивают встряхиванием и помещают в водяную баню при 38˚С на 10 мин, после чего с жидкостью обеих пробирок проделывают пробу с реактивом Фелинга. Сравнивают окраску.

Оформление работы. Данные занести в таблицу, сделать вывод о специфичности изученных ферментов.

Практическое значение работы. Ферменты с абсолютной и относительной групповой субстратной специфичностью, обладающие меньшей избирательностью действия на субстраты, участвуют, как правило, в гидролизе питательных веществ или превращении чужеродных соединений. В частности, α-амилаза и сахараза проявляют специфичность не к структуре субстрата в целом, а к типу гликозидных связей, находящихся в соответствующих углеводах.