Раздел V. Биохимия витаминов и гормонов

Тема 5.1. Общая витаминология. Обмен и функции витаминов В₁, В₂, В₃

Диазореакция на тиамин (витамин В₁)

Недостаток тиамина в пище вызывает заболевание бери-бери, связанное с поражениями нервной системы, сердечно-сосудистой системы и желудочно-кишечного тракта.

Биологическая роль тиамина хорошо известна – в виде тиаминпирофосфата он выполняет коферментные функции в реакциях декарбоксилирования α-кетокислот и в транскетолазной реакции.

Принцип метода. Раствор тиамина при добавлении к нему деазореактива и щелочи окрашивается в оранжевый или красный цвет вследствие образования сложного соединения тиамина с диазобензосульфокислотой.

Ход определения. К 5 каплям 1%-ного раствора сульфаниловой кислоты прибавляют 5 капель 5%-ного раствора нитрата натрия, получают диазореактив. К диазореактиву прибавляют небольшое количество порошка тиамина и 5-7 капель 10%-ного раствора карбоната натрия. Жидкость окрашивается в оранжевый или красный цвет.

Реакция восстановления рибофлавина (витамин В₂)

Принцип метода. Рибофлавин обладает окислительно-восстановительными свойствами. Физиологическая роль витамина В2 выяснилась, когда было установлено, что рибофлавин входит в состав коферментов ФАД и ФМН, являющихся простетической группой ряда ферментов, относящихся к классу оксидоредуктаз.

Реакция обусловлена восстановлением рибофлавина выделяющимся моноводородом сначала в родофлавин (промежуточное соединение красного цвета), а затем в бесцветную лейкоформу:

рибофлавин (окисленная форма) рибофлавин (восстановленная форма)

Ход определения. В пробирку наливают 10 капель взвеси рибофлавина в воде, добавляют 5 капель концентрированной соляной кислоты и опускают гранулу металлического цинка. Выделяющийся в ходе реакции водород взаимодействует с рибофлавином: раствор приобретает постепенно розовую окраску, затем обесцвечивается.