Лабораторна робота № 9

Тема: Антибіотична активність мікроорганізмів.

Мета роботи: Визначити антибіотичну активність мікроорганізмів за допомогою антибіотиків.

Матеріали, реактиви, обладнання: Диски з антибіотиками, чашки Петрі з МПА, бактеріологічна петля, пінцети, бульйонна культура Staphilоcoccus аиrеиs, Е. соli.

Основні відомості

Термін - антибіотики - ввів у 1943 році мікробіолог Ваксман С.Я. Цим терміном визначають високоактивні вторинні метаболіти мікробів, які здатні пригнічувати ріст інших мікроорганізмів. Антибіотики доводять існування антагоністичних відносин між мікроорганізмами.

У теперішній час багато антибіотиків отримують промисловим способом. Відомо понад 2000 антибіотиків, але враховуючи високу токсичність більшості з них для людини, використовують лише близько 50.

Найбільша кількість антибіотиків виділена з актиноміцетів, які мешкають у ґрунті. Процес одержання препаратів нових антибіотиків досить складний. Він складається з декількох основних етапів:

1. Пошук у природі й виділення чистих культур мікроорганізмів-продуцентів антибіотиків.

2. Вивчення антибіотичних властивостей виділених антагоністів і кількісне визначення їх антибіотичної властивості.

3. Попередня ідентифікація антибіотика.

4. Виділення і хімічна очистка.

5. Вивчення біологічної активності препарату на тваринах і людині.

Важливу роль у виявленні мікробів-антагоністів, у вивченні їх антибіотичних властивостей відіграють добре підібрані тест-організми. У лабораторних умовах найчастіше використовують у якості тест-організмів мікробів.

Визначення антибіотичної активності виділених мікробів проводять на твердих поживних середовищах. У цьому випадку метод заснований на здатності антибіотика дифундувати в агаризоване середовище і створювати бактерицидний й бактеріостатичний вплив на тест-організми. Найчастіше використовують метод перпендикулярних штрихів. Сутність цього методу полягає в тому, що спочатку по діаметру чашки Петрі шириною 1-1,5 см бактеріологічною петлею проводять густий засів досліджуваного на антагонізм мікроорганізму. Чашку витримують у термостаті до проростання культури. Потім петлею проводять підсів штрихом стандартних суспензій тест-культур, перпендикулярно до зони вирощеного мікроорганізму. Культивують у термостаті за температури, оптимальної для тест-мікроорганізму.

Для виявлення антибіотичної активності використовують метод паперових дисків. Сутність цього методу полягає в тому, що диски просочують досліджуваним розчином і розкладають на поверхню агаризованого середовища.

Хід роботи

Студенти вивчають чутливість культур стафілокока до антибіотиків методом паперових дисків. Суспензію Staphilоcoccus аиrеиs наносять на поверхню МПА в чашку Петрі за допомогою піпетки, розтирають скляним шпателем по поверхні агарової пластинки (метод посіву газоном). Чашку залишають на 15-20 хвилин при кімнатній температурі. Потім на поверхню агару стерильним пінцетом розкладають на однаковій відстані один від одного паперові диски, просочені антибіотиком.

Серед антибіотиків такі: пеніцилін, стрептоміцин, тетрациклін, левоміцитін та інші.

Облік результатів проводять на наступному занятті. Антибіотик, яким просочений диск, дифундує в агар. Якщо на його поверхні засіяно чутливий мікроб, то навколо диска з’являється зона пригнічення росту. Чим більш чутливим виявляється до антибіотика мікроб, тим більшим буде діаметр прозорої зони.

Результати оформлюють у вигляді таблиці, наприклад: