Подготовка предметных стекол

Очень важным моментом в работе является подбор предметных и покровных стекол для препаратов. От толщины стекол зависит правильная фокусировка препаратов. Световой микроскоп имеет объективы с определенным рабочим состоянием (у иммерсионных объективов оно равно 0,1-0,12 мм). Ясно, что этими объективами можно воспользоваться в том случае, если толщина предметного и покровного стекол не выходит за допустимые величины, а именно 1-1,2 мм для предметных и 0,17 мм для покровных стекол. Кроме того, стекла должны иметь ровную поверхность, без мутных пятен и царапин.
Обязательный момент – чистота стекол. Нормальная окраска возможна при условии использования абсолютно чистых стекол.
Обычно предметные стекла готовят так: кипятят в мыльной воде, промывают в водопроводной и опускают в хромовую смесь. В этой смеси стекла выдерживают 2-24 часа. Хромовую смесь хранят в широком стеклянном сосуде, из которого стекла вынимают пинцетом и промывают проточной и дистиллированной водой. Иногда предметные стекла очищают спиртом и бензином, а затем прожигают с одной стороны на пламени спиртовки. У чистых стекол поверхность полностью смачивается водой и не видно никаких жирных следов. Вода легко расплывается по их поверхности, не образуя капель шаровидной формы. Отобранные стекла помещают в стакан с дистиллированной водой, где они находятся до употребления.

Покровные стекла отбирают размером 20 х 20, 18 х 18, 24 х 24 мм. Чистят покровные стекла в смеси спирта и эфира, вытирают мягкой тряпочкой и хранят в сухом виде до использования.
^ 4. Стерилизация стеклянной посуды

Основной способ стерилизации стеклянной посуды – обработка сухим горячим воздухом при температуре не выше 180⁰ С в течение 1- 3 ч (таблица).

Таблица – Условия стерилизации стеклянной посуды сухим жаром

При этом погибают и вегетативные клетки и споры микроорганизмов. Стерилизацию осуществляют в специальных суховоздушных (сухожаровых) сушильных шкафах, приспособленных для стерилизации. Они различаются по форме и способе обогрева, но имеют сходное устройство. Их делают из термостойких материалов – обычно из металла и асбеста. Внутри стерилизатора имеются полки для размещения посуды, а наверху – отверстие, в котором с помощью пробки укрепляют термометр. В верхней части сушильных шкафов также имеется отверстие для вентиляции, которое при стерилизации закрывают. Стерилизаторы и шкафы с электрическим обогревом снабжены терморегулятором, обеспечивающим автоматическое поддержание необходимой температуры.

Подготовка посуды к стерилизации.

Посуда перед стерилизацией должна быть тщательно вымыта и завернута в бумагу для сохранения стерильности после прогревания. Также завертывают в бумагу чашки Петри, пипетки. Колбы, пробирки закрывают ватными пробками. На пробки можно надеть бумажные колпачки, предохраняющие горлышко от пыли. Посуду развертывают непосредственно перед употреблением.

Стерилизация.

Посуду, подготовленную для стерилизации, загружают в стерилизатор (или сушильный шкаф) не слишком плотно, чтобы обеспечить циркуляцию воздуха и равномерный надежный прогрев стерилизуемого материала. Стерилизатор (сушильный шкаф) во время работы должен быть плотно закрыт. При отсутствии терморегулятора необходимо строго следить за температурой, так как при ее понижении не осуществится стерилизация, а при нагреве выше 180⁰ С бумага и пробки начинают обугливаться. По окончании стерилизации шкаф не открывают до тех пор, пока температура в нем не упадет до 80⁰ С, поскольку при резком охлаждении иногда нарушается стерильность материала, а сильно нагретое стекло может растрескаться. Лучше всего выгружать посуду, когда температура в стерилизаторе сравняется с комнатной.
Посуду можно стерилизовать и в автоклаве. Режим стерилизации в этом случае существенно зависит от объема сосудов и толщины стекла. Для автоклавирования посуду готовят, как и для сухожаровой стерилизации. Следует иметь в виде, что в автоклаве посуда увлажняется.

Мелкие металлические инструменты: петли, иглы, пинцеты, ножницы, шпатели – стерилизуют прокаливанием в пламени (т.е. нагреванием докрасна) непосредственно перед использованием. На пламени кратковременно прожигают предметные и покровные стекла, стеклянные шпатели и палочки, фарфоровые ступки и пестики, горлышки колб, пробирок, бутылок, а также ватные пробки при пересевах культур и разливах сред. В пламени погибают и вегетативные клетки и споры микроорганизмов.
При работе со шприцами желательно использовать одноразовые стерильные шприцы.
Термостойкие приборы для культивирования микроорганизмов а также детали к этим приборам, резиновые пробки и шланги стерилизуют в автоклаве. При этом емкости завертывают в бумагу. Режим автоклавирования выбирают в соответствии с термостойкостью материала, из которого сделан прибор.
Некоторые предметы (металлические инструменты, мелкие стеклянные детали, мембранные фильтры) иногда стерилизуют длительным (в течение 20-30 мин) кипячением в дистиллированной воде. Металлические и стеклянные предметы лучше всего кипятить в специальных закрытых сосудах – стерилизаторах. Можно использовать для этих целей и металлическую посуду. Мембранные фильтры обычно кипятят в колбе или химическом стакане, закрытых ватными пробками. Однако этим способом стерилизации в микробиологической практике пользуются редко в связи с тем, что длительное кипячение может повредить материал, а сокращение времени кипячения может не обеспечить стерильность, так как споры некоторых микроорганизмов способны сохранять жизнеспособность даже после длительного кипячения.
Надежность стерилизации при кипячении может быть увеличена внесением в воду какого-либо бактерицидного средства: 2%-го формальдегида, 1%-й бриллиантовой зелени или 0,1%-й сулемы. Но в этом случае возможно загрязнение биоцидами стерилизуемых предметов.

Список использованных источников

1. http://www.himikatus.ru/

2. Никольский Б.П., Григоров О.Н., Позин М.Е. Справочник химика, Госхимиздат, 1967 г.

3. ГОСТ 25336-82 «Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры».