В рассмотренных ранее как полевых, так и лабораторных методах оценки устойчивости о ней судили после взаимодействия растения или отдельных его органов и частей с патогеном. Другими словами, все методы предусматривают прямой контакт двух партнеров патологического процесса, причем для одного из них — патогена — непременно должны быть созданы оптимальные условия, то есть необходим инфекционный фон.
При использовании косвенных методов оценки устойчивости нет необходимости проводить сравнительное испытание на инфекционном фоне. Исследователь отбирает нужные ему растения не путем непосредственной оценки поражаемое™ болезнью, а на основе выявления отдельных особенностей и показателей анато-мо-морфологического, физиологического или биохимического характера, которые коррелируют с устойчивостью к болезни, поэтому контакт растения с патогеном не предусмотрен. Косвенные методы, безусловно, предназначены для предварительной оценки исходного материала и материала, получаемого на начальных этапах селекционного процесса. Кроме того, они позволяют дать предварительную оценку устойчивости, когда исследователь испытывает затруднения с сохранением, накоплением или наработкой инфекционного материала, а иногда и в случаях его отсутствия.
Существует много методов косвенной оценки, которые непрерывно совершенствуются по мере поступления новых сведений о биологии растений и их патогенов. Набор таких методов также непрерывно расширяется. Далее будут схематично рассмотрены некоторые наиболее доступные косвенные методы оценки растений на устойчивость к инфекционным болезням. Такое изложение предусматривает модификации, обусловленные спецификой поставленных исследователем задач.
Использование токсинов и экстрактов фитопатогенньгх грибов и бактерий. Об устойчивости в этом случае судят по реакции растений на введение культуральной жидкости или токсинов в их ткани путем нанесения на поверхность либо помещения срезанных растений или их частей в растворы, содержащие продукты метаболизма фитопатогенного гриба или бактерии.
В ВИР разработан метод оценки бобовых трав к фузариозному увяданию, основанный на использовании токсинов гриба, выделяемых им при культивировании на жидкой среде Чапека. Возбудителя фузариозного увядания культивируют на этой среде в течение 20 дней при температуре 20...23 °С. Используют кулыураль-ную жидкость, разведенную стерильной водой в 2, 3 и 5 раз. Растения клевера, люцерны и других бобовых трав выращивают в теплицах в течение 1,5...2 мес, затем корни их отмывают и помещают в стеклянные стаканы с культуральной жидкостью. Для контроля используют стерильную воду. Через 4...7 сут судят о степени устойчивости, учитывая время и степень проявления симптомов увядания и концентрацию культуральной жидкости. Восприимчивые формы поникают на 3...4-е сутки, у более устойчивых завядает только верхушечная часть.
Использование выжатого из растений сока или экстракта из тканей растения. Питательную среду для получения культурального фильтрата многих патогенных грибов готовят следующим образом: 100 г натертых клубней картофеля отваривают в 1 л воды, затем в отвар добавляют 0,6 % нитрата натрия, 0,15 % фосфорнокислого калия и 0,05 % сернокислого магния. Среду автоклавируют 30...45 мин при давлении 0,5 атм. Для опытов по оценке устойчивости гриб выращивают на этой среде в течение 2 мес. Процеженную культуральную жидкость стерилизуют в течение 1 ч текучим паром и после остывания помещают в нее растения или их части.
Об устойчивости растений можно судить и по реакции самого патогена на соки или водный экстракт из их тканей. Например, при изучении устойчивости плодовых культур к факультативным паразитам патогенов выращивают на агаризованных средах, приготовленных из водных вытяжек тканей растения-хозяина. Заливают 1 л воды 200 г мелконарезанных тканей и настаивают в воде температурой 80 °С в течение суток. К полученному и профильтрованному настою добавляют 2,5 % агар-агара и стерилизуют смесь 2,5 ч текучим паром. В чашки Петри с таким агаром вносят чистую культуру гриба и ведут наблюдение за ростом и развитием патогена, учитывая такие показатели, как энергия роста колоний, пигментация среды, характер воздушного мицелия гриба, время начала проявления спороношения и другие показатели, характеризующие уровень агрессивности. По состоянию колоний и скорости их роста судят об устойчивости или восприимчивости растений, из которых готовили настои.
Использование показателей физиологической реактивности растений. Такие показатели растений могут служить дополнительными критериями для оценки устойчивости к факультативным паразитам при отборе и селекции сортов. Так, устойчивость пшеницы к возбудителям корневой гнили неспецифична: она связана с общей устойчивостью растений к неблагоприятным условиям внешней среды. У мягкой пшеницы холодостойкость обычно сопровождается засухоустойчивостью и меньшей поражаемостью гельминтоспориозом, а у твердой пшеницы засухоустойчивость, наоборот, сопровождается сильным поражением этой болезнью. В то же время холодостойкость обусловлена более высокой концентрацией Сахаров в клеточном соке. При меньшей их концентрации метаболиты возбудителя обладают большей токсичностью для растений. Таким образом, по холодостойкости и концентрации Сахаров можно отбирать формы мягкой пшеницы на устойчивость к корневой гнили.
Об общей жизнеспособности растений можно судить по результатам выдерживания семян в воде температурой 45 "С в течение 4 ч или при 48 °С в течение 3 ч. Как показывают результаты сравнительных испытаний, семена, сохраняющие жизнеспособность после такой обработки, обычно происходят от растений, устойчивых к ряду факультативных* паразитов.
Косвенным показателем устойчивости свеклы к корнееду могут служить высокая энергия прорастания семян и их способность прорастать в солевых растворах повышенной концентрации.
Устойчивость корнеплодов свеклы к кагатной гнили оценивают по потере ими массы при провяливании. У сортов с сильно-поражаемыми корнеплодами такие потери более значительны. В лабораторных условиях корнеплоды высокоустойчивых сортов теряли за 6 дней провяливания 30 % массы, среднепоражаемых — 40, а сильнопоражаемых — 53 %.