По системе АВО

Группы крови определяют по стандартным сывороткам (простая реакция), стандартным эритроцитам (двойная или перекрестная реакция) и с помощью циклонов.

Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки. Для определения групповой принадлежности крови у человека используются три стандартные сыворотки 0(I), A(II), B(III), и реже - AB(IV) группы. Они готовятся главным образом из крови, редко из других жидкостей (асцитической, плеврального экссудата). Чаще всего кровь берется от доноров, может быть использована трупная или ретроплацентарная кровь. После отстаивания крови забирается сыворотка, к которой добавляется консервирующее вещество – борная кислота из расчета 3,0 порошка на 100мл сыворотки, но лучше прибавлять ее немного больше. Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки должны удовлетворять следующим требованиям:

1. В течение 15 – 20 с. должна появиться агглютинация с соответствующими эритроцитами, а через 2 минуты агглютинация должна быть четкой.

2. Не давать агглютинации с эритроцитами нулевой группы и одноименной.

3. Иметь титр не ниже 1:32.

4. Сыворотка должна быть прозрачной, без признаков бактериального загрязнения.

5. На каждой ампуле должен быть паспорт с обозначением группы, срока годности, титра, места и времени приготовления, нанесены соответствующего цвета полосы (одна, две, три, четыре).

Для предупреждения возможных ошибок при определении групп крови производится окраска стандартных изогемагглютинирующих сывороток:

Группы A(II) – в синий цвет, B(III) - в розовый, AB(IV) – синий, 0(I) – не окрашивается, хранятся сыворотки при температуре +8 - 9º герметично закрытыми. Используют активные стандартные сыворотки трех групп (0, А, В) с титром не ниже 1:32, двух серий.

Методика определения группы крови: определение группы крови производят при температуре от +15 до +20ºС. на тарелках или планшетах. На левой стороне планшета надписывают группы крови в буквенной транскрипции. Посередине верхнего края планшета отмечают фамилию донора (реципиента). Используют стандартные сыворотки двух серий трех групп (О, А, В) с титром не ниже 1:32. На тарелку или планшет наносят по одной-две капли стандартных сывороток в два ряда, начиная с первой группы слева направо. Капли крови наносят пипеткой около каждой капли сыворотки и смешивают углом предметного стекла. Количество крови должно быть в 8 – 10 раз меньше, чем сыворотки. Затем планшет осторожно покачивают в руках, что способствует быстрой и четкой агглютинации. Агглютинация начинается на 3 минуте. По мере наступления агглютинации, добавляют по одной капле физиологического раствора и продолжают наблюдать до истечения 5 минут. Результат читают в проходящем дневном свете, если агглютинация нечеткая, к смеси добавляют по одной капле изотонического раствора хлорида натрия, после чего дают окончательное заключение о групповой принадлежности.

1. Отсутствие агглютинации во всех трех каплях указывает на то, что в исследуемой крови нет агглютиногенов, т. е. кровь относится к группе 0(I).

2. Наступление агглютинации в каплях с сыворотками 0(I) и B(III) указывает на то, что в исследуемой крови имеется агглютиноген А, т. е. кровь относится к группе A(II).

3. Наличие агглютинации в каплях с сыворотками группы 0(I) и A(II) указывает на то, что в исследуемой крови имеется агглютиноген В, т. е. кровь группы B(III).

4. Агглютинация во всех каплях указывает на наличие в исследуемой крови агглютиногенов А и В, т. е. кровь относится к группе AB(IV). Однако в этом случае учитывая, что агглютинация со всеми сыворотками возможна за счет неспецифической реакции, необходимо нанести на планшет или тарелку две-три капли стандартной сыворотки группы AB(IV) и добавить к ним 1 каплю исследуемой крови. Сыворотку и кровь перемешивают, и результат реакции наблюдают в течение 5 минут. Если агглютинация не наступила, то исследуемую кровь относят к группе AB(IV). Если же агглютинация появляется с сывороткой группы AB(IV), значит, реакция неспецифическая.

Определение группы крови двойной реакцией (по стандартным сывороткам и стандартным эритроцитам).

Данная методика позволяет определить наличие в крови агглютиногенов А и В, агглютининов α и β, т. е. определить полную формулу крови

Определение групповой принадлежности крови с использованием цоликлонов анти – А и анти – В. Цоликлоны анти – А и анти – В являются продуктом гибридомных клеточных линий. Это моноклональные анти – А и анти – В антитела, которые продуцируются двумя различными гибридомами. Цоликлоны анти – А и анти – В представляют собой разведенную асцитную жидкость мышей, в которой содержатся специфические иммуноглобулины класса (I, G, M), направленные против группоспецифических антигенов А или В человека.

Ошибки при определении групповой принадлежности крови.

Могут зависеть от трех причин:

· технических;

· неполноценности стандартных сывороток и стандартных эритроцитов;

· биологических особенностей испытуемой крови.

Ошибки по техническим причинам:

· неправильное расположение сывороток на планшете. Вместо нанесенных сывороток группы (В) справа их наносят слева;

· неправильное количественное соотношение сывороток и эритроцитов;

· применение недостаточно чистых планшетов и других предметов, соприкасающихся с кровью;

· для каждой сыворотки должна быть отдельная пипетка. Для промывания пипеток следует применять только физиологический раствор хлорида натрия;

· неправильная запись исследуемой крови;

· несоблюдение положенного для реакции агглютинации времени.

При поспешности, когда реакцию учитывают до истечения 5 минут, агглютинация может не наступить, если в испытуемой крови имеются слабые агглютиногены. При передержанной более 5 минут реакции может произойти подсыхание капель с краев, симулирующие агглютинацию, что также приведет к ошибочному заключению.

Ошибки, зависящие от применения неполноценных стандартных сывороток и стандартных эритроцитов:

· слабые стандартные сыворотки с титром ниже 1:32 или истекшим сроком годности могут вызвать позднюю и слабую агглютинацию;

· применение негодных стандартных сывороток и эритроцитов, нарушение стерильности.

Ошибки от биологических особенностей крови:

· наличие в крови слабых агглютиногенов

· кровь обладает свойством панагглютинации или аутоагглютинации, т. е. дает неспецифическую агглютинацию со всеми сыворотками и даже с собственной.

Резус – фактор (Rh –фактор).

Резус – фактор впервые описан в 1940 г. К.Ландштейнером и А. Винером как новое иммунологическое свойство крови, присущее большинству людей.

Резус – фактор находится на эритроцитах людей независимо от возраста и пола и не связан с системой АВО. Находясь на эритроцитах человека наряду с агглютиногенами А и В, резусагглютиноген не имеет в сыворотке соответствующих антител – антирезус, подобных α или β, но антитела могут выработаться у лиц с резус – отрицательной кровью под влиянием систематического попадания в организм таких лиц Rh – антигена.

Подобное может быть при условии: переливание человеку резус – отрицательному, резус – положительной крови. Когда у беременной резус – отрицательной женщины развивается резус – положительный плод.

Резус – фактор является сильным, тепловым антигеном, так как при введении в организм резус – отрицательных лиц может вызвать в нем продукцию специфических резус – антител. Оптимальной температурой для определения резус – агглютиногена в эритроцитах является 45 - 48º С (в чашках Петри).

Определение резус – фактора и резус – антител.

Определение резус – принадлежности крови доноров проводят в два этапа:

1. Применение стандартного универсального реагента антирезус Rhο(D). 2. Затем со стандартным универсальным реагентом анти - Rh’о(DC), а также со стандартной сывороткой анти - Rh’’’о(DCE). Если исследуемая кровь дала положительную реакцию (агглютинацию) с одним из указанных реагентов, то она считается резус – положительной.

Техника определения На дно пробирки нанести 1 каплю стандартного реагента и 1 каплю исследуемой крови (или эритроцитов). Содержимое перемешать, встряхнуть и медленно наклонить пробирку горизонтально, чтобы содержимое растеклось по стенке пробирки. Затем для исключения неспецифической агрегации эритроцитов в пробирку необходимо добавить 2 – 3 мл 0,9% раствора NaCI и перемешать, не взбалтывая, путем 2 – 3 кратного перевертывания. Наличие агглютинации в виде крупных хлопьев из эритроцитов на фоне просветленной жидкости указывает на резус – положительную реакцию крови Rh+. Отсутствие агглютинации (гомогенно окрашенная жидкость) указывает на отрицательную реакцию крови (Rh-).