Методические рекомендации
Пермь – 2006
УДК
ББК
Авторский коллектив: зав. кафедрой микробиологии ПГМА, профессор Э.С. Горовиц; канд. мед. наук, доцент кафедры микробиологии С.В. Поспелова.
Методические рекомендации предназначены для самостоятельной работы студентов при подготовке к практическим занятиям и выполнении учебно-исследовательских работ.
Методические рекомендации адресованы студентам лечебного, педиатрического, медико-профилактического, стоматологического факультетов и факультета высшего сестринского образования медицинской академии.
Рецензент: Зав. кафедрой эпидемиологии ПГМА,
профессор И.В. Фельдблюм
© Авторский коллектив
© ГОУ ВПО «ПГМА им. ак. Е.А. Вагнера Росздрава»
Содержание:
- Предмет санитарной микробиологии с3
- Принципы и методы проведения санитарно-микробиологических исследований с3
- Основные группы санитарно-показательных микроорганизмов (СПМ) с5
- Санитарная микробиология воды с11
- Санитарная микробиология почвы с14
- Санитарная микробиология воздуха с15
- Санитарно-микробиологические исследования в медицинских учреждениях с16
- Тестовые задания с19
Санитарная микробиология – наука, изучающая микрофлору окружающей среды и ее влияние на здоровье человека и экологическую ситуацию в различных биотопах. Главная задача практической санитарной микробиологии – раннее обнаружение патогенной микрофлоры во внешней среде. При этом следует помнить, что человек и теплокровные животные являются основным резервуаром возбудителей большинства инфекционных заболеваний и подавляющее число возбудителей передается с помощью аэрогенного и фекально-орального механизмов.
Началом развития санитарной микробиологии можно считать 1888 год, когда французский врач Е. Масе предложил считать кишечную палочку показателем фекального загрязнения воды.
Принципы проведения санитарно-микробиологических исследований
- Правильный забор проб. Его проводят с соблюдением всех необходимых условий, регламентированных для каждого исследуемого объекта. Соблюдается стерильность. При невозможности немедленного проведения анализа материал сохраняют в холодильнике не дольше 6-8 часов.
- Серийность проводимых анализов. Большинство исследуемых объектов содержит самые разнообразные микроорганизмы, распределенные крайне неравномерно. Проводят забор серии проб из разных участков объекта. В лаборатории образцы смешивают, а затем точно отмеряют необходимое количество материала (обычно среднее по отношению к исследуемому материалу в целом).
- Повторность отбора проб. Как правило, в исследуемых объектах состав микрофлоры меняется достаточно быстро, кроме того, патогенные микроорганизмы распределяются в них неравномерно. Соответственно повторный отбор проб позволяет получить более адекватную информацию.
- Применение только стандартных методов исследования – дает возможность получать сравнимые результаты в различных лабораториях.
- Использование комплекса тестов: прямых (выявляющих патогены) и косвенных.
- Оценка объектов по совокупности полученных результатов – с учетом других гигиенических показателей (органолептических, химических, физических и т.д.)
Методы проведения санитарно-микробиологических исследований
Практическая санитарная микробиология использует два основных метода оценки санитарно-эпидемического состояния среды.
I. Методы прямого обнаружения возбудителя. Являются наиболее точными и надежными критериями оценки эпидемической опасности внешней среды. Основной недостаток – низкая чувствительность.
Трудность выделения патогенных микроорганизмов на питательных средах обусловливают следующие факторы:
- Сравнительно низкое содержание патогенных микроорганизмов во внешней среде, составляющих 1/30000 всего видового состава микрофлоры внешней среды. Кроме того, она распределена неравномерно.
- Выделение одного возбудителя не всегда свидетельствует о присутствии других видов патогенов. То есть, необходимо проводить исследования практически в отношении каждого патогена, что не осуществимо.
- Изменчивость патогенов. Последние, попадая во внешнюю среду, приобретают новые свойства, затрудняющие их распознавание.
- Конкурентные взаимоотношения между патогенами и сапрофитами при совместном выращивании на питательных средах.
- Недостаточная элективность питательных сред и необходимость использования лабораторных животных и культур тканей.
II. Методы косвенной индикации возможного присутствия возбудителя во внешней среде.
Используют два критерия, по которым можно косвенно судить о возможном присутствии возбудителя во внешней среде:
- Общее микробное число (ОМЧ)
- Содержание санитарно-показательных микроорганизмов (СПМ)
- Общее микробное число (ОМЧ) определяют путем подсчета всех микроорганизмов в 1 грамме или 1 мл субстрата.
При этом исходят из предположения, что чем больше объект загрязнен органическими веществами, тем выше ОМЧ и тем вероятнее присутствие патогенов. Однако, это не всегда так, так как ОМЧ может быть большим за счет сапрофитов, а патогены могут отсутствовать. Поэтому более адекватно расценивать ОМЧ как показатель интенсивности загрязнения внешней среды органическими веществами.
ОМЧ определяют двумя методами:
- Прямой подсчет. Проводят под микроскопом с помощью специальных камер, например, Петрова или Горяева, либо специальных электронных счетчиков. Предварительно исследуемую пробу гомогенизируют и вносят краситель (обычно эритрозин). Можно проводить прямой подсчет и на мембранных фильтрах, через которые пропускают исследуемую жидкость или взвесь. Метод применяют в экстренных случаях. При необходимости срочного ответа о количественном содержании бактерий (например, при авариях в системе водоснабжения, при оценке эффективности работы очистных сооружений и др.). Основной недостаток – невозможность подсчитать бактерии, когда образуются их скопления или когда они «прилипают» к частицам исследуемого субстрата. Не удается подсчитать мелкие микроорганизмы, не говоря уже о вирусах. И, наконец, нельзя отличить живые от погибших микроорганизмов.
- Количественный посев на питательные среды. Из приготовленных серийных десятикратных разведений исследуемой жидкости или суспензии по 1 мл переносят в стерильные чашки Петри и заливают расплавленным и остуженным до 45-500 С МПА. Равномерно смешивают жидкости и после застывания агара чашки помещают в термостат. После инкубации подсчитывают число выросших колоний и с учетом разведений высчитывают число жизнеспособных микробов в единице объема исследуемого объекта. При этом выявляются лишь мезофильные аэробные и факультативно-анаэробные бактерии, способные размножаться на МПА. Таким образом, получаемые цифры значительно ниже истинного количества микроорганизмов в исследуемом объекте.
- Санитарно-показательными называют микроорганизмы, по которым можно косвенно судить о возможном присутствии патогенов во внешней среде. Исходят из предположения, что чем больше объект загрязнен экстрактами человека и животных, тем больше будет санитарно-показательных микроорганизмов и тем вероятнее присутствие патогенов.
Основные характеристики СПМ:
- Микроорганизм должен постоянно обитать в естественных полостях человека и животных и постоянно выделяться во внешнюю среду.
- Микроб не должен размножаться во внешней среде (исключая пищевые продукты), или размножаться незначительно.
- Длительность выживания микроба во внешней среде должна быть не меньше, а даже больше, чем у патогенных микроорганизмов.
- Устойчивость СПМ во внешней среде должна быть аналогичной или превышать таковую у патогенных микроорганизмов.
- У микроба не должно быть во внешней среде «двойников»или аналогов, с которыми их можно перепутать.
- Микроб не должен изменяться во внешней среде, во всяком случае, в сроки выживания патогенных микроорганизмов.
- Методы идентификации и дифференциации микроорганизмов должны быть простыми.
СПМ условно разделяют на 3 группы.
Между ними нет четко очерченных границ; некоторые микроорганизмы являются как показателями фекального, так и аэрогенного загрязнения. Все СПМ расценивают как индикаторы биологического загрязнения.
Группа А включает обитателей кишечника человека и животных; микроорганизмы расценивают как индикаторы фекального загрязнения. В нее входят так называемые бактерии группы кишечных палочек – БГКП. (для питьевой воды по новому нормативному документу - Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды. Методические указания МУК 4.2.1018-01 – данная группа называется общие колиформные бактерии ОКБ); БГКП – ОКБ, эшерихии, энтерококки, протеи, сальмонеллы; а также сульфит-восстанавливающие клостридии (включая Cl.perfringens), термофилы, бактериофаги, синегнойная палочка, кандиды, ацинетобактеры и аэромонады.
Группа В включает обитателей верхних дыхательных путей и носоглотки; микроорганизмы расценивают как индикаторы аэрогенного загрязнения. В нее входят альфа- и бета-гемолитические стрептококки, стафилококки (плазмакоагулирующие, лецитиназа-положительные, гемолитические и антибиотикоустойчивые; в некоторых случаях определяют вид стафилококка – золотистый).
Группа С включает сапрофитные микроорганизмы, обитающие во внешней среде; микроорганизмы расценивают как индикаторы процессов самоочищения. В нее входят бактерии-аммонификаторы, бактерии-нитрификаторы, некоторые спорообразующие бактерии, грибы, актиномицеты и др.