III. Финальная идентификация чистой

Культуры

На данном этапе изучаются биохимические, биологические, се-

рологические и генетические свойства культуры.

Идентификация микроорганизмов

С помощью бактериофагов

Бактериофаги имеют выраженное литическое действие на мик-

роорганизмы. Эту особенность используют для определения их вида.

С этой целью в две пробирки с мясо-пептонным бульоном засевают

исследуемую культуру бактерий. Потом в одну из них добавляют не-

сколько капель индикаторного фага. Пробирки инкубируют при

оптимальной температуре в течение 18−24 ч. Сравнивают мутность

бульона в контрольной и опытной пробирках и делают вывод о чув-

ствительности микроорганизмов к литическому действию бакте-

риофагов (рис. 19).

Рис. 19. Литическое действие бактериофагов

(справа – позитивный результат)

С этой целью можно использовать плотную питательную среду,

на которую газоном засевают исследуемую культуру бактерий. После

подсушивания чашек на них бактериологической петлей или пасте-

ровской пипеткой наносят каплю соответствующего разведения бак-

териофага, которое указано на ампуле. Посевы инкубируют в термо-

стате при 37 °С в течение 18−24 ч и фиксируют наличие прозрачных

круглых пятен, которые свидетельствуют о литическом действии

бактериофагу. Позитивный результат свидетельствует о принадлеж-

ности бактерий к определенному виду.

Фаготипирование микроорганизмов проводят с целью анализа

эпидемиологической ситуации для определения источника инфекции.

Чаще всего его выполняют при диагностике стафилококковых, ки-

шечных и других инфекций.

В основе теста лежит определение фаговариантов (фаговаров)

возбудителей. Для этого дно чашки с мясо-пептонным агаром по

числу бактериофагов разделяют на квадраты. Выращивают четырех-

часовую бульонную культуру исследуемого штамма и 1 мл ее засе-

вают на поверхность среды. Распределяют равномерно культуру по

поверхности среды и избыток ее сливают. Чашку подсушивают в

термостате при 37 °С в течение 30−40 мин и на поверхность агара в

каждый квадрат капают пипеткой бактериофаги соответствующих

разведений. Посевы ставят в термостат или оставляют при комнатной

температуре в течение 18−20 ч, после чего оценивают результаты.

Учет результатов проводят на темном фоне с помощью лупы. В зави-

симости от степени чувствительности культуры к бактериофагам вы-

деляют разные степени лизиса бактерий, который оценивается по

наличию лизиса или его отсутствию (рис. 20).

Рис. 20. Фаготипирование бактерий

Учитывая, что чувствительность бактерий к фагу является до-

статочно постоянным признаком, сравнивают фаготипы исследуемых

культур с фаготипом микроба, который был выделен от достоверного

источника инфекции. При их совпадении  делают вывод об обнару-

женном источнике инфекции.