Методы получения и титрования фагов. Практическое использование фагов для профилактики, лечения, индикации и типирования бактерий

 

Для получения препарата бактериофага культуру бактерий заражают бактериофагом. На следующий день зараженную культуру фильтруют через бактериальный фильтр. Для количественной характеристики бактериофагов используют такой критерий, как титрбактериофага.

Титр фага можно выразить двумя показателями:

1. Наибольшее разведение препарата, при котором бактериофаг лизирует соответствующие бактерии (количество активных корпускул бактериофага в 1 мл препарата).

2. Методы титрования бактериофага:

ñ метод серийных разведении в пробирках с жидкой питательной средой по Аппельману;

ñ двуслойный агаровый метод, при котором подсчитывают число негативных колоний фага на фоне сплошного роста бактерий – метод Грациа.

 

Практическое применение.

1. Фаготип (фаговар) – позволяет определить видовую принадлежность исследуемой культуры.

2. Фаготипирование исследуемых культур с целью эпидемиолоического анализа инфекционных заболеваний.

3. Применение фагов с лечебными и профилактическими целями проводят редко. Есть препараты дизентерийного, сальмонеллезных, коли-протейного, стафилококкого и других бактериофагов, а также наборы для фаготипирования. В настоящее время препараты бактериофагов применяют для лечения дизентерии, сальмонеллеза, гнойной инфекции, а сальмонеллезные фаги применяются для профилактики одноименного заболевания в детских коллективах.

11. Питательные среды и их классификация. Требования, предъявляемые к питательным средам. Изучение биохимических свойств бактерий в зависимости от их метаболитной активности.

 

Питательная среда – среда, содержащая различные соединения сложного или простого состава, которая применяется для размножения бактерий и др.микроорганизмов в лабораторных или промышленных условиях. Состоит из 3 главных компонентов: мясопептонный агар (МПА), субстрат, индикатор.

 

Классификация по происхождению:

1. Естественные,

2. Искусственные (на основе естественных продуктов),

3. Синтетические (на основе химических веществ).

 

Классификация:

1. Простые,

2. Сложные.

 

Классификация по плотности:

1. Жидкие (физ-био-хим состава),

2. Плотные (твердые) (1,5-2),

3. Полужидкие (0,3-0,7),

4. Сыпучие.

 

Классификация по назначению:

1. Основные (основа для приготовления более сложных). Пит.бульон и пит.агар.

2. Дифференциально-диагностические (для разграничения отдельных видов/групп микроорганизмов. Принцип построения основан на том, что разные виды бактерии по б/х активности и имеют неодинаковый набор Е, расщепляющих субстраты пит.среды.. Есть основная пит.среда, обеспечивающая раззмножение бактерий, опред.хим.субстрат и цветной индикатор (например, инд.Андрерре).

3. Элективные самого разнообразного состава (для избирательного выделения и накопления опред.вида из материалов, содержащих разнообразную микрофлору). Для их создания исходят из био.особенностей, которые отличают данные микробы от большинства других. Например, stph — при увеличенной [NaCl], холерный вибрион — в щелочной среде.

4. Консервирующие – для доставки материала в лабораторию.

 

Требования:

1. Стерильность,

2. Н2О,

3. Должна быть источники углерода, азота, серы, фосфат-группы и другие минеральные вещества и микроэлементы,

4. Оптимальная рН,

5. Прозрачность (если прозрачна, то роста нет),

6. Буфферность,

7. Свет,

8. Температура,

9. Среды – унифицированы (для каждой культуры),

10. Доступность кислорода,

11. Осмотическое давление – изотоничность

12. Определленный окислит-восстановит.потенциал

13. Ростковые факторы, играют роль катализаторов метаболич.процессов (вит.круппы В, никотиновая кислота, а/к, липиды, пурин-пиримидин.основания

14. Вит. + учитывание, оксотрофы, хемоорганотрофы, литотрофы.

 

Изучают:

ñ Морфологию бактериальных клеток в окрашенных мазках,

ñ Биохимические признаки культуры по ее способности ферментировать углеводы (глюкоза, лактоза, сахароза, мальтоза, маннит и др.), образовывать индол, аммиак и сероводород, являющиеся продуктами протеолитической активности бактерий.

 

Типы питания бактерий. Механизм питания микробов. Культивирование бактерий в зависимости от типа питания.

 

Типы питания бактерий:

1. Ауксотрофы – используют для построения своих клеток неорганический углерод – СО2,

2. Гетеротрофы – используют органический углерод.

3. Фототрофы – используют свет,

4. Хемотрофы – энергия за счет ВР,

5. Литотрофы – способны использовать неорганические доноры электронов,

6. Органотрофы – способны использовать органические доноры электронов,

7. Сапрофиты – питаются мертвыми организмами,

8. Паразиты – гетерозависимые в получении питательных веществ от макроорганизма (облигатные – полностью лишены возможности жить вне клеток макроорганизма; факультативные – могут жить вне хозяина и размножаться, как сапрофиты).

9. Гетерохемоорганотрофы – это бактерии, изучаемые медицинской микробиологией.

 

Механизм питания:

1. Пассивная диффузия (без затрат энергии, по градиенту концентрации: О2, Н2О, СО2, N2),

2. Облегченная диффузия (без затрат энергии, с помощью белков-переносчиков),

3. Активный транспорт (с затратой энергии, против градиента концентрации:

ñ с помощью пермеаз – определенное соединение,

ñ белки-переносчикии фосфорилирование переносимой молекулы, например - глюкоза).

 

Для культивирования.

Для роста и жизнедеятельности микроорганизмов обязательно наличие в среде обитания питательных материалов для построения компонентов клетки и источники энергии. Для микробов необходимы вода, источники углерода, кислорода, азота, водорода, фосфора, калия, натрия и других элементов. Требуются также микроэлементы: железо, марганец, цинк, медь для синтеза ферментов. Различные виды микробов нуждаются в тех или иных факторах роста, таких, как витамины, аминокислоты, пуриновые и пиримидиновые основания.