Фазово-контрастная микроскопия

При прохождении пучка света через неокрашенный объект изменяется лишь фаза колебания световой волны, что не воспринимается человеческим глазом. Чтобы изображение стало контрастным, необходимо превратить фазовые изменения световой волны в видимые амплитудные. Это достигается с помощью фазово-контрастного конденсора и фазового объектива.

Схема фазово-контрастного микроскопа. Фазово-контрастный конденсор представляет собой обычный объектив с револьвером и набором кольцевых диафрагм для каждого объектива. Фазовый объектив снабжен фазовой пластинкой, которую получают нанесением солей редкоземельных элементов на объектив. Изображение кольцевой диафрагмы совпадает с кольцом фазовой пластинки соответствующего объектива. Фазово-контрастная микроскопия значительно повышает контрастность объекта и используется для изучения нативных препаратов.

 

Люминесцентная микроскопия

Люминесцентная микроскопия основана на способности некоторых веществ под влиянием падающего на них света испускать лучи с другой (обычно большей) длиной волны (флюоресцировать). Такие вещества называют флюорохромами (акридиновый желтый, родамин и др.). Объект, обработанный флюорохромом, при освещении ультрафиолетовыми лучами приобретает яркий цвет в темном поле зрения. Основной частью люминесцентного микроскопа является осветитель, имеющий лампу ультрафиолетового цвета и систему фильтров к нему. Очень важно использование нефлуоресцентного иммерсионного масла. Люминесцентная микроскопия в практической микробиологии используется для индикации и идентификации возбудителей инфекционных заболеваний.

Схематическое изображение флуоресцентного микроскопа:

1. дуговая лампа;

2. кварцевый коллектор;

3. кювета, заполненная раствором сернокислой меди;

4. передняя часть коллектора;

5. ультрафиолетовый фильтр;

6. призма;

7. пластинка из уранового стекла;

Окулярный фильтр, поглощающий ультрафиолетовые лучи.

 

Электронная микроскопия

Возможности оптических микроскопов ограничены слишком большой длиной волны видимого света (6000 А). Объекты, размеры которых меньше этой величины, находятся за пределами разрешающей способности светового микроскопа. В электронном микроскопе вместо световых волн используются электронные лучи, обладающие чрезвычайно малой длиной волны и высокой разрешающей способностью.

Схема трансмиссионного электронного микроскопа. В качестве источника электронных лучей применяют электронную пушку, основой которой служит вольфрамовая нить, нагретая электрическим током. Между вольфрамовой нитью и анодом на пути электронов находится электрическое поле высокого напряжения. Электронный поток вызывает свечение фосфоресцирующего экрана. Проходя через объект, части которого имеют различную толщину, электроны будут соответственно задерживаться, что проявится на экране участками затемнения. Объект приобретает контрастность. Препараты для электронной микроскопии готовят на тончайших коллоидных пленках, исследуют объекты после их высушивания («нативные препараты»), напыления при помощи тяжелых металлов, ультратонких срезов метода реплик и др. С помощью электронной микроскопии можно обнаружить самые мелкие структуры, получить увеличение до 200 000 и увидеть объекты размером 0,002 мкм.

3.Особенности строения и химического состава клеточной стенки Гр(+) и Гр(-) бактерий.

 

Основной структурный компонент – пептидогликан (у истинных бактерий – это сложный гетерополимер, состоящий из полисахаридных гликановых цепей, связанные между собой пептидными мостиками). Придает клетке жесткость, регидность, участвует в инфекционном процессе.

Грам(+):

ñ петеидогликана до 90-95% в клеточной стенке,

ñ многослойный и связан с тейхоевыми и липотейховыми кислотами (это сложные соединения глицерина и рибитола с углеводами). Придают отрицательный заряд и роль в адгезии к субстрату.

ñ 5-10% - белки, полисахариды, липиды.

ñ В микроскопе выглядит – однослойно.

Грам(-):

ñ пептидогликан – однослойный, в клетке – 5-10%.

ñ Поверх пептидогликана есть наружная мембрана, она пронизана порами (белки-порины), проницаема.

ñ В микроскопе клеточная стенка выглядит многослойной структурой.

ñ Липополисахарид: эндотоксин → интоксикация

ñ О-АГ