Дыхание микроорганизмов. Сущность процессов дыхания. Культивирование микробов в зависимости от типа биологического окисления

 

Дыхание – процесс получения энергии в реакциях окисления – АТФ.

Доноры электронов – органические или неорганические соединения, акцепторы электронов – неорганические соединения.

 

Аэробное дыхание – требуется молекулярный кислород.

Анаэробное дыхание – используются сульфаты, нитраты, карбонаты.

Особенность – наличие цепи переноса электронов, то есть ряда специальных соединений, способных подвергаться обратимому окислению и восстановлению.

 

Методы культивирования аэробов – в чашках Петри, необходим свободный кислород.

 

Методы культивирования анаэробов.

1. Снижение окислительно-восстановительного потенциала,

2. Механический путь:

ñ метод посева уколом в агар,

ñ метод микроаэростатический – откачивание или замена воздуха,

3. Биологические пути:

ñ среда Фетнера (2 культуры на чашке Петри с разных сторон от вырезанной полоски),

ñ способ Виньяль-Вестола – железо-сульфидная среда, запаянная пробирка.

 

Микробные ассоциации. Методы выделения чистых культур микроорганизмов.

 

Микробные ассоциации (микробиоценозы) – объединяет среда обитания – совокупность микроорганизмов. К микробным ассоциациям относятся микробные колонии, которые объединяются в биопленки за счет внеклеточного вещества. Микробные сообщества проявляют свойства многоклеточных организмов. Внутри микробного сообщества бактерии объединены в целостную структуру за счет межклеточных контактов: цитоплазматические мостики и тесное слипание бактериальных клеток. Значение – защитная функция, обеспечивая более высокую устойчивость к воздействию внешних факторов. В организме человека бактерии также существуют в виде микробных сообществ.

 

Методы выделения.

1. Метод Пастера - последовательное разведение исследуемого материала в жидкой питательной среде до концентрации одной клетки в объеме.

2. Метод Коха («пластинчатые разводки») - последовательное разведение исследуемого материала в расплавленном агаре (температура 48-50 С), с последующим разливом в чашки Петри, где агар застывает. Посевы делают, как правило, из трех-четырех последних разведений (бактерий в них мало -> на чашках Петри - изолированные колонии из одной материнской клетки. Из изолированных колоний получают чистую культуру бактерий пересевом на свежие среды.

3. Метод Шукевича - применяется для получения чистой культуры которая обладает «подвижностью». Посев исследуемого материала - у основания скошенного агара. Подвижные микробы способны подниматься вверх по скошенному агару, неподвижные формы остаются расти внизу, на месте посева. Пересевая верхние края культуры, можно получить чистую культуру.

4. Метод Дригальского - исследуемый материал разводят в пробирке стерильным физиологическим раствором или бульоном. Одну каплю материала вносят в первую чашку и стерильным стеклянным шпателем распределяют по поверхности среды. Затем этим же шпателем (не прожигая его в пламени горелки) делают такой же посев во второй и третьей чашках. При посеве на третью чашку, бактерии будут распределяться по поверхности питательной среды отдельно друг от друга. Через 1-7 суток выдерживания чашек в термостате каждая бактерия дает изолированную колонию, которую пересевают на скошенный агар с целью накопления чистой культуры.

Методы лабораторной диагностики инфекционных болезней.

 

Существует 5 основных методов диагностики:

1. микроскопический — позволяет обнаружить возбудителя непосредственно в материале, взятом от больного. Для этого мазок окрашивают различными способами. Этот метод играет решающую роль при диагностике многих инфекционных заболеваний: туберкулеза, малярии, гонореи и др.;

2. бактериологический — заключается в посеве исследуемого материала на питательные среды. Этот метод позволяет выделить возбудителя в чистом виде и изучить его морфологические признаки, ферментативную активность и идентифицировать его;

3. биологический метод — осуществляют путем выделения возбудителя при заражении лабораторных животных, которые восприимчивы к данному заболеванию. Этот метод дорогостоящий, поэтому применяется ограниченно;

4. серологические методы исследования — основаны на выявлении специфических иммунных антител в сыворотке крови больного. Для этого используют различные иммунологические реакции: реакция Видаля (используется для выявления брюшного тифа);

5. аллергический метод — ставятся кожно-аллергические пробы, введение аллергена накожно или внутрикожно; используются для диагностики туберкулеза, туляремии, лепры и т. д.