Глава 2 Методика исследования

Объекты и материалы исследования

В работе были использованы метил-b-циклодекстрин (MbCD), b-циклодекстрин (bCD), Тритон Х-100, N-формил-Met-Leu-Phe (fMLP) были получены от фирмы “Sigma”(США), N-ацетил-D-глюкозамин (GlcNAc), декстран Т70 фирмы «Roth» (Германия); скополетин, пероксидаза хрена, азид натрия, лимфопреп фирмы “Nycomed” (Норвегия); лектины фирмы НПК Лектинотест (Львов, Украина): Triticum aestivum L. (WGA), Urtica diooca L. (UDA), Glycine hispida L. (SBA), Canavalia ensiformis L. (ConA), Leucojum vernum L. (LVA), Arachis hypogaea L. (PNA), Caragana arborescens L. (CABA), Viscum Album L. (VAA), Phaseolus vulgaris L. (PHA-E/-L), Vicia sativa L. (VSA), Sambucus nigra L. (SNA).

Методика выделения нейтрофилов

Донорскую кровь, стабилизированную 3,8%-ным раствором цитрата натрия, получали из Республиканской станции переливания крови МЗ РБ. Нейтрофилы выделяли из 20 мл донорской крови. Кровь смешивали с 6% раствором декстрана Т70 в соотношении 5:1 и осаждали клеточную массу в течение 30-40 мин при комнатной температуре с использованием пластиковых шприцов. Слой обогащенной лейкоцитами плазмы собирали в пробирки и центрифугировали в течение 8 мин при 1500 об/мин с использованием лабораторной центрифуги ОПН-3, после этого примесь эритроцитов удаляли гипотоническим лизисом. К осадку клеток добавляли 3 мл охлажденных 0,2% NaCl, затем 3 мл 1,6% NaCl и 3 мл фосфатно-солевого буфера (PBS), не содержащего Mg²⁺ и Ca²⁺ (pH 7,3; 137 мМ NaCl; 2,7 мМ KCl: 10 мМ Na₂HPO₄ / KH₂PO₄) и аккуратно перемешивали. Полученную суспензию центрифугировали в течение 5 мин при 1500 об/мин. Осадок клеток ресуспендировали в 6 мл PBS и наслаивали на 3 мл лимфопрепа. Центрифугировали в течение 15 мин при 1500 об/мин при комнатной температуре. Полученный осадок нейтрофилов отмывали в буфере PBS в течение 6 мин при 1500 об/мин. Отмытые нейтрофилы суспендировали в PBS и хранили при 4°С в течение нескольких часов.