Метод осаждения с целлофановыми плёнками по Котельникову-Хренову

Оборудование. Предварительно готовят плёнки из гидрофильного целлофана толщиной 22 мкм. (нарезанные прямоугольные кусочки плёнки размером 2×3см помещают в чашки Петри с 50% раствором молочной кислоты или глицерина. Эти растворы размягчают плёнку. Полоски выдерживают в растворе 24 часа), химические стаканчики на 50 мл, покровные стекла, микроскоп.

Ход определения. Берут пробу фекалий массой 2 г, помещают в стаканчик ёмкостью 50 мл с небольшим количеством воды и размешивают, постепенно добавляя воду. Затем взвесь фильтруют в другой стаканчик, 5 мин отстаивают и сливают надосадочную жидкость, а к осадку добавляют воду. Так промывают осадок второй раз. Воду сливают, а осадок помещают на предметные стёкла или в чашку Петри и покрывают обработанными плёнками. Через 5-10 мин препарат готов для исследования.

Клиническое значение. Данная методика применяется для диагностики трематодозных заболеваний животных (фасциолёз, дикроцелиоз, описторхоз, парамфистоматоз, эуритрематоз, эхиностоматидозы, простогонимоз и др.)

 

Метод Котельникова-Хренова.

Реактивы.

1. Насыщенный раствор аммиачной селитры. Готовят из расчёта 1,5 кг реактива на 1 л воды. Соль аммиачной селитры растворяют в горячей воде в эмалированной посуде. Соль кладут в ёмкость с горячей водой порциями при подогревании и постоянном помешивании до полного растворения. Затем фильтруют в чистую посуду. Раствор используют холодным. Плотность приготовленного раствора – 1,32 г/мл.

   Оборудование. Химические стаканчики на 50 мл, предметные и покровные стекла, микроскоп.

Ход определения. Пробу фекалий 3,0 г. кладут в химический стаканчик объемом 50 мл, заливают небольшим количеством свежеприготовленного раствора аммиачной селитры и тщательно размешивают. При помешивании добавляют раствор порциями до объёма 50 мл. Затем взвесь фильтруют через ситечко в другой стаканчик. Профильтрованную взвесь оставляют для флотации на 10 минут. Затем металлической петлёй прикасаются к поверхности взвеси, снимают 3-4 капли с разных мест, переносят на предметное стекло, покрывают покровным стеклом и исследуют под микроскопом при малом увеличении с целью обнаружения ооцист или яиц гельминтов. Петлю перед исследованием каждой пробы фламбируют или последовательно промывают водой в 2-х банках. Чтобы не допустить быстрого высыхания и кристаллизации капель на предметных стёклах в жаркое время года к каждой капле, снятой с поверхности взвеси, добавляют каплю глицерина, разведённого водой 1:1.

Метод Фюллеборна.

Реактивы.

1. Насыщенный раствор натрия хлорида. Раствор готовят из расчёта 400-420 г хлорида натрия на 1 л воды. Соль растворяют в горячей воде в эмалированной посуде. Соль кладут в ёмкость с горячей водой порциями при подогревании и постоянном помешивании до полного растворения. Затем фильтруют в чистую посуду. Раствор используют холодным. Плотность приготовленного раствора – 1,18-1,2 г/мл.

Оборудование. Такое же как по методу Котельникова-Хренова.

Ход определения. Такой же, как и в предыдущем методе, только время флотации составляет 45-60 минут.

Комбинированный метод Котельникова-Хренова.

Комбинированный метод основан на комбинации совершенно противоположных приёмов обработки проб фекалий – седиментации и флотации, т.е. это седиментационно-флотационный метод.

Реактивы.

1. Насыщенный раствор аммиачной селитры.

Оборудование. Химические стаканчики на 50 мл, центрифужные пробирки, стеклянные палочки, центрифуга, микроскоп

Ход определения. Пробу фекалий 3 г. размешивают в стаканчике ёмкостью 50 мл добавляя в него порциями воду. Водную взвесь фильтруют через ситечко или марлю в другой стаканчик и отстаивают 5 минут. Верхний слой сливают, оставляя осадок с надосадочной жидкостью в таком количестве, чтобы он поместился в обычную центрифужную пробирку. Осадок взбалтывают, переливают в центрифужную пробирку и центрифугируют 2 минуты при 1,5 тыс об/мин. Воду до осадка сливают, а к осадку добавляют раствор аммиачной селитры, взбалтывают и центрифугируют при том же режиме. Затем с поверхности взвеси петлёй снимают 3 капли, помещают на предметное стекло и микроскопируют.

Клиническое значение. Комбинированный метод более эффективен, чем флотационный, позволяет выявить до 100% инвазированных животных.

 

Гельминтоскопия.

Реактивы.

1. Глицерин или 50 %-ный раствор молочной кислоты.

Оборудование. Предметные стекла, микроскоп.

Ход определения. Членик или гельминтов отмывают водой, кладут на предметное стекло, капают на них 50% молочную кислоту или глицерин для просветления кутикулы, накрывают вторым предметным стеклом и ставят на 20 минут под груз. Затем микроскопируют для просмотра внутреннего строения гельминта с целью его дифференциации.

Гельминтолярвоскопические методы исследования фекалий.

Культивирование личинок  по Петрову и Гагарину.

Оборудование. Чашки Петри, термостат, микроскоп.

Ход определения. Пробы фекалий 10,0 г кладут в чашки Петри, слегка увлажняют, закрывают крышкой и ставят в термостат при температуре 25-30°С на 7-10 дней. Ежедневно их открывают для аэрации и увлажняют. Сформировавшиеся в яйцах личинки вылупляются, растут, развиваются и дважды линяют. Через 7-10 дней формируются личинки 3 стадии, которые выделяют и микроскопируют.