Микологические исследования

При подозрении в заболевании рыб грибковыми болезнями проводят микологические исследования.

Обычно при микозах рыб нет необходимости проводить полный комплекс микробиологических исследований, но иногда приходится определять видовую принадлежность грибов с по­следующим изучением их свойств. Для этого грибы выращи­вают на специальных средах.

При исследовании на бранхиомикоз микроскопируют не-кротизированные, подвергшиеся гнилостному разложению участки жабр больных рыб. Лепестки жабр помещают на пред­метное стекло в несколько капель воды, раздавливают вторым предметным стеклом и просматривают при малом увеличении. В поле зрения микроскопа хорошо видны гифы гриба и споры.

При гистологическом исследовании жабр на срезах в ка­пиллярах и респираторных складках видны гифы гриба и спо­ры, которые окрашиваются гематоксилином в темно-лиловый цвет, а эозином — в красный.

Для выращивания возбудителя бранхиомикоза на пита­тельных средах берут патологический материал только от тру-

209

пов рыб, жабры которых подверглись разложению, потому что из свежей жаберной ткани живых рыб выделить гриб практически невозможно. Отобранный материал соответствую­щим образом подготавливают и высевают на агар Сабуро, Чапека, МПБ или кровяной бульон и выращивают при темпе­ратуре 20—22 °С.

При микроскопии культуры гриба хорошо видно несепти-рованный мицелий, состоящий из сильно разветвленных гиф шириной 8—30 мкм. Внутри гиф просматриваются споры диа­метром 5—9 мкм.

Для обнаружения сапролегниевых грибов исследуют под микроскопом соскобы с кожи, жабр, носовых ходов, а также икру. При этом хорошо просматриваются гифы гриба и зоо­споры.

Сапролегниевые грибы выращивают в пробирках, содер­жащих стерильные семена конопли или льна в дистиллирован­ной воде. Через 2—3 дня на семенах появляется веткоподоб-ный рост гриба. Полученную культуру промывают стерильной дистиллированной водой для того, чтобы избавиться от бакте­рий, и опять высевают на семена. Так повторяют несколько раз. Затем берут один гиф гриба и высевают на агар Чапека, Сабуро, МПА.

Гриб хорошо растет на кусочках вареной бараньей печени в стерильной воде. Выращивают в термостате при температуре 20—22 °С. Через 2—3 дня появляется характерный рост чистой культуры гриба в виде больших пушистых белоснежных колоний, состоящих из свободных, толстых несептироваппых гиф.

Ихтиоспоридиевы грибы культивируют на мясо-пептонном агаре с 1 % сыворотки крови крупного рогатого скота.

Биологическая проба

Биологическую пробу проводят при необходимости устано­вить заразность патологического материала или вирулент­ность выделенных чистых культур вирусов, бактерий, грибов.

Кроме того, биопробу ставят при решении вопроса о сня­тии карантина и ограничений с хозяйства при многих инфек­ционных заболеваниях.

Для биопробы берут клинически здоровую, упитанную рыбу из благополучных водоемов, восприимчивую к предполагаемо­му заболеванию.

Биопробу можно ставить в аквариумах, садках, чанах, а так­же в карантинных или изолированных прудах. В любом случае необходимо поддерживать оптимальный гидрохимический ре-

210

жим и кормление, характерные для вида и возраста рыб, взятых в опыт.

При постановке биопробы используют чистые культуры вирусов, бактерий, грибов, а также суспензии и взвеси, приго­товленные из свежего патологического материала.

Заражают рыб патологическим материалом так. В стериль­ную ступку отбирают кусочки печени, почек, селезенки, мозга, жидкость брюшной полости и др., добавляют туда стерильное стекло или песок и тщательно растирают. Полученную суспен­зию разбавляют стерильным физиологическим раствором (1: 10) и фильтруют через стерильную марлю, после чего ис­пользуют для заражения подопытных рыб. Суспензию вводят в брюшную полость в области брюшного плавника в дозе 0,2—0,3 мл рыбам массой 20—30 г или втирают в скарифици­рованную поверхность кожи в области спинного плавника. Воспроизведение болезни при введении рыбам изучаемого материала указывает на его заразность.

Для подтверждения вирусной этиологии болезни обычно используют зараженные вирусным агентом однослойные кле­точные культуры.

Вируссодержащий культурный материал вводят в брюшную полость карпам массой 20—30 г в дозе 0,2—0,3 мл, а форели массой 10 г — 0,1 мл. Иногда заражение проводят контактным способом при совместном содержании здоровых и больных рыб.

При заражении рыб бактериями используют одно-, двух­суточные культуры, разведенные стерильным физиологическим раствором до концентрации 1 млн. микробных тел в 1 мл. Материал вводят в брюшную полость карпам массой 20— 30 г в дозе 0,1 мл, 30—50 г— 0,2 мл и массой 60—100 г — 0,3 мл.

При диагностике микозов для постановки биопробы ис­пользуют нативный материал, содержащий возбудителя на всех стадиях развития, или же применяют чистые культуры пато­генных грибов, выращенные на специальных питательных средах.

Для определения токсичности водной среды (без дифферен­циации ядов) проводят биологическую пробу непосредственно в водоемах, где наблюдается гибель рыб, или в аквариумах, наполненных водой из обследуемого источника. В опыт берут наиболее чувствительных к токсическим веществам рыб (окунь, ерш, форель, щука, гуппи), а также водных беспозвоночных (дафний, личинок хирономид и др.). Биологическая проба при этом позволяет очень быстро определить токсичность воды и наметить пути дальнейших диагностических и химико-анали­тических исследований.

211

В каждой серии опытов при исследовании одного мате­риала используют для заражения не менее 10 рыб, такое же количество берут и на контроль. Чтобы исключить случайные результаты биопробы, опыт и контроль повторяют дважды.

Результаты биологической пробы определяют по характеру клинических признаков болезни, патологоанатомическим изме­нениям, смертности подопытных рыб при полном сохранении контрольных и выделению исходного возбудителя от заболев­ших или погибших рыб.

Биологическая проба считается положительной, если у 50 % и больше подопытных рыб ярко проявляются клинические и патологоанатомические признаки болезни, с последующей ги­белью больных рыб при полном сохранении их в контроле. Сроки появления клинических признаков и гибель рыб для каждой болезни различны. Они зависят от инкубационного периода болезни, для выявления которой поставлена биопроба, температуры воды, состояния подопытной рыбы. При острых инфекциях симптомов болезни может и не быть, так как ги­бель рыб наступает до их развития. При отсутствии признаков болезни у подопытных рыб за ними наблюдают в течение 3 недель, после чего результат биопробы считается отрица­тельным.

По окончании опытов рыбу утилизируют, а емкости, в ко­торых она содержалась, дезинфицируют 10 %-ным раствором хлорной извести.