Клинический материал при подозрении на мочеполовой микоплазмоз и уреаплазмоз

- у женщин мазки или соскобы из уретры, канала шейки матки, больших вестибулярных желез;

- у мужчин – отделяемое уретры, первая порция мочи, секрет предстательной железы, сперму (у мужчин при бесплодии).

  Клинический исследуемый материал при подозрении на респираторный микоплазмоз: смыв с носоглотки, мокрота, лаважная жидкость, бронхиальные смывы, плевральная жидкость, кровь.

             Культуральное исследование. Для культурального исследования лучше использовать пробы со слизистой оболочки мочеиспускательного канала, материал из канала шейки матки, влагалища, парауретральных протоков. Особенности биологии возбудителя, маленькие размеры генома, отсутствие многих ферментных систем микоплазмы очень требовательны к условиям культивирования. Наиболее значимым методом лабораторной диагностики мочеполового микоплазмоза и уреаплазмоза является бактериологическое исследование.

Для культивирования используют: среды, содержащие все предшественники, необходимые для синтеза макромолекул, транспортную среду (бульон PPLO, лошадиная сыворотка, дрожжевой экстракт, бензилпенициллин); среда SP-4, применяют для культивирования и выявления микоплазм у мужчин, больных негонококковым уретритом, и у женщин с воспалительными заболеваниями мочеполовых органов. Для всех видов микоплазм и уреаплазм необходимы холестерин, жирные кислоты и фосфолипиды. Наиболее часто используемые для культивирования микоплазм среды; среда Хайфлика, среда SP-4, Среда, разработанная Г.Я. Каган. Среды для выделения уреаплазм: бульон, содержащий мочевину и индикатор, агаризованная среда А5К, дифференцировочные агаровые среды А7 и А8.

 При интерпритации результатов необходимо учитывать, что микоплазмы и уреаплазмы в концентрации 10³КОЕ/мл могут быть обнаружены у клинически здоровых лиц, поэтому диагностически  значимым является обнаружение их в 10⁴  и более КОЕ.

Иммуноиндикация. В  микробиологической диагностике микоплазмоза используют выявление антигенов в реакциях агглютинации, иммунофлюоресценции (РИФ), иммуноферментного анализа (ИФА).

Принцип РИФ основан на реакции АГ-АТ: меченные ФИТЦ антитела против микоплазм специфически соединяются с антигенами, которые находятся в фиксированных мазках. При положительной реакции в люминисцентном микроскопе наблюдается флюоресценция микоплазм. Микоплазмы светятся ярко желтым цветом. В случае обнаружения микоплазм культуральным методом, в РИФ делается заключение о наличие генерализованного инфекционного процесса.

Молекулярно-генетическое исследование. В настоящее время для диагностики используют метод ДНК – зондирования, для обнаружения микоплазм в клиническом материале. Высокочувствительным является метод ДНК / РНК блот-гибридизации.

Разработаны генные зонды с использованием рекомбинантных плазмид, позволяющие выявить микоплазмы, тест-системы для мультиплексной ПЦР, позволяющие одновременно выявлять в одном клиническом образце M. hominis,M genitalium,U. urealyticum.

Положительные данные в ПЦР при отрицательных результатах культурального и иммунологических методов при отсутствии клинических проявлений свидетельствует о бессимптомном носительстве.