Методы оценки В-системы иммунитета. Интерпретация результатов и пути коррекции нарушений

При оценке В- системы иммунитета к скрининговым тестам относятся: определение количества CD19+ и CD20+ клеток, IgG, IgM и IgA, а также IgG1,2,3,4, к развернутым- бласттрансформацию на митоген лаконоса и S.aureus, пповерхностных маркеров В- лимфоцитов.

Для оценки В-системы иммунитета применяется несколько методов.

1. Определение В-лимфоцитов в крови.

2. Определение в крови уровня иммуноглобулинов. Проводят определение суммарной концентрации иммуноглобулинов и количество иммуноглобулинов разных классов.

3. Определение наличия и уровня изогемагглютининов в сыворотке крови, а также естественных (нормальных) антител к широко распространенным бактериям и вирусам. В качестве антигенов можно использовать кишечную палочку, стафилококковые токсины, вирус герпеса и др. Следует отметить и иметь в виду, что альфа- и бета-изогемагглютинины относятся к Jg M.

4. Стимуляция биосинтеза иммуноглобулинов В-лимфоцитами in vitro.

5. Исследование антителогенеза (первичного и вторичного ответа) после активной иммунизации несколькими убитыми вакцинам.Применяют коклюшную и убитую полиомиелитную вакцины, дифтерийный и столбнячный анатоксин, полисахаридные антигены, выделенные из пневмококков, менингококков и бактерий кишечной группы.

6. Исследование катаболизма иммуноглобулинов в организме. В кровь вводят меченый препарат человеческого иммуноглобулина.

7. Биопсия лимфатических узлов, костного мозга, участков слизистой оболочки кишечника. Эту процедуру проводят с целью гистологического обнаружения плазматических клеток, наличие и структуры лимфоидных фолликулов.

8. Кожные реакции, выявляющие гиперчувствительность немедленного типа. К таким пробам относятся ШИК-реакция и другие.

Метод проточной цитофлюориметрии для количественного определения популяций и субпопуляций ЛФ.

Проточный цитофлюориметр – прибор, позволяющий быстро оценить состав клеточной популяции по флюоресценции и оптическим характеристикам клеток. С помощью этого прибора можно определить абсолютное и относительное число клеток разных популяций и субпопуляций. К основным преимуществам метода относятся быстрота анализа и возможность одновременной оценки многих параметров клетки: размера, оптической плотности, поверхностных антигенов. Результаты исследования выражают в виде абсолютного и относительного числа лимфоцитов разных популяций. Оценку результатов проводят с учетом нормальных показателей, которые зависят от возраста, пола и вида. Простой способ проверки надежности результатов заключается в том, что относительное содержание основных популяций лимфоцитов (Т, В и НК-лимфоцитов) в сумме должно составлять 100%. В норме у взрослых около 70% лимфоцитов крови составляют Т-лимфоциты, при этом соотношение лимфоцитов CD4/CD8 превышает 1, как правило, оно составляет 1,5–2,0 остальные 30% приходятся на В- и НК-лимфоциты.

ЦТТ для количественной оценки ЛФ.

Методы оценки функциональной активности Т- и В- ЛФ (РБТЛ).

Для определения функциональной активности Т-системы применяются следующие методы: подсчет циркулирующих Т-лимфоцитов, реакция бластной трансформации лимфоцитов (РБТЛ), реакция ингибиции миграции лимфоцитов (РИМЛ), спонтанное розеткообразование клеток (Е РОК), чувствительность лимфоцитов к кортизолу, цитотоксические тесты при использовании антисывороток к Т-лимфоцитам, определение функциональной активности Т-супрессоров и др. (А. Н. Чередеев, 1976, и др.). Наиболее информативными методами являются РБТЛ и Е-РОК.

 Метод РБТЛ основан на том, что Т-лимфоциты в питательной среде под влиянием стимулятора фотогемагглютинина (ФГА) могут превращаться (трансформироваться) в недифференцированные зародышевые клетки (бласты). Допускается, что это происходит за счет освобождения лизосомальных ферментов и разрушения РНК- Чем интереснее происходит превращение лимфоцитов в бласты, тем активнее и полноценнее Т-система (О. И. Епифанова с соавт., 1977). Существует два метода определения РБТЛ: морфологический и изотопный. Наиболее перспективным методом является изотопный, основанный на определении блаеттрансформацин по включению меченого тимидина (Из) в ДНК лимфоцитов (И. Н. Брауде, 1969; П. Г. Назаров, В. И. Пуринь, 1975, и др). Результаты выражаются в индексах стимуляции.

Методы определения ЛФ различных субпопуляций.

Диагностические антигены. Принципы приготовления эритроцитарных диагностикумов.

Серологические реакции, их классификация, механизм взаимодействия антигенов и антител, практическое применение.

Методы определения фагоцитарной активности лейкоцитов крови.

Показатели, характеризующие фагоцитарную активность клеток крови животных.

Лизоцим, его биологическое значение и методы определения.

Бактерицидная активность сыворотки крови, биологическое значение, методы определения.

Реакция иммунодиффузии в геле по Оухтерлони. Характеристика, цели проведения реакции.

Иммунный статус. Методы оценки иммунного статуса.

Лаборатория иммунодиагностики: цель и задачи; техника безопасности.

Лабораторные модельные системы в иммунологии.

Клинический анализ крови и значение для оценки иммунного статуса.

Моноклональные антитела (МКА). Принцип получения и применения МКА.

Реакции, используемые для определения титра антител.

ПЦР - основные принципы и применение для диагностики иммунозависимых заболеваний.

Иммунохимические реакции, основанные на применении меченных антител: ИФА, РИА, ИФМ.

Методы определения активности комплемента.

Методы получения сыворотки и плазмы крови.

Методы для диагностики иммунодефицитных состояний.

Методы диагностики аутоиммунных заболеваний.

Прогностическое значение показателей иммунного статуса.