Очистка белков методом диализа (делали на биофизике)

С помощью диализа очищают высокомолекулярные растворы белковых веществ от примеси низкомолекулярных соединений (солей, сахаров и др.).

Реактивы:

а) раствор яичного белка с хлористым натрием

б) азотнокислое серебро, 0,5%-ный раствор (в склянке темного стекла);

в) азотная кислота, 10%,-ный раствор;

г) едкий натр,10%-ный раствор;

д) сернокислая медь, 1%-ный раствор.

В мешочек из целлофана или коллодия (или в высушенный пузырь теленка, поросенка) наливают до половины раствор яичного белка (с хлористым натрием). Мешочек подвешивают на стеклянной палочке и погружают в стакан с дистиллированной водой (рис. 4). Диализ проводят при комнатной температуре. Через 40-60 минут из стакана берут в две пробирки по 2 мл воды. В одной пробирке проводят реакцию на ионы хлора, для чего воду подкисляют несколькими каплями 10%-ного раствора азотной кислоты и добавляют 2-3 капли раствора азотнокислого серебра, выпадает белый осадок хлористого серебра (можно измерить кондуктометром или ионоселективными электродами на иономере). С пробой во второй пробирке производят биуретовую реакцию. Если диализ проводится правильно, биуретовая реакцию будет отрицательной.

Рис.4. Простейший диализатор

Диализ можно ускорить, периодически меняя воду в стакане (через каждые 15-20 мин.) или же используя проточный диализатор. Диализ проводят до получения отрицательной реакции на ионы хлора.