Специфические АТ, обуславливающие лизис (растворение) клеток, носят название лизинов. Эти АТ применительно к бактериям называются бактериолизинами, к эритроцитам – гемолизинами и т.д.
Лизины способны проявить свое лизирующее действие на АГ только в присутствии комплемента, который является составной частью любой свежей сыворотки.
Таким образом, в основе реакции лизиса (РСК) лежит взаимодействие трех компонентов: АГ, АТ и комплемента.
В начале реакция идет по типу агглютинации, затем к комплексу АГ-АТ через Fc-фрагмент антител присоединяется комплемент. Наступает активация компонентов комплемента, которая приводит к потери подвижности бактерий (р. иммобилизации трепонем - при сифилисе), изменению формы (набухают), и, наконец, совсем растворяются (р. агглютинации-лизиса при лептоспирозе, р. лизиса - при возвратном тифе).
РСК относится к сложным серологическим реакциям, в которых участвуют, кроме АГ и АТ, ещё гемолитическая система (р. гемолиза), выявляющая результат реакции.
РСК проводится в два этапа при участии двух систем:
первая система (тестовая) – инкубация смеси, содержащей АГ-АТ-комплемент;
вторая система (индикаторная) – гемолитическая сыворотка (гемолизины) + эритроциты – показывает исход реакции в первой системе: в случае положительного результата реакции в первой системе (образования комплекса АГ+АТ+комплемент), во второй системе не произойдет гемолиза ввиду отсутствия комплемента (эритроциты оседают на дно пробирки). В случае отрицательного результата в первой системе вторая сопровождается гемолизом, т. к. образуется комплекс эритроциты + гемолизины + комплемент (рис.33).
Для постановки РСК Борде-Жангу, которая применяется с цельюопределения антител к гонококку (N. gonorrhoeae) при хронической гонореи требуются следующие компоненты:
1.Компоненты тестовой системы:
1) испытуемая сыворотка неизвестными противогонококковыми антителами (предварительно инактивируют нагреванием при 56°С в течение 30 минут);
2) гонококковый диагностикум– взвесь убитых N. gonorrhoeae;;
3) комплемент;
2.Индикаторная (гемолитическая) система:
1) 3% взвесь эритроцитов барана (корпускулярный антиген-агглютиноген);
2) гемолитическая сыворотка;
3.физиологический раствор.
В качестве комплемента в РСК применяют свежую и высушенную сыворотку морской свинки, т. к. в крови морской свинки комплемент содержится в наибольшем количестве и присутствует постоянно, чем у др. животных. Перед постановкой РСК следует проводить титрование комплемента в реакции гемолиза (эритроциты барана, гемолитическая сыворотка, комплемент, физ. раствор) и определение рабочей дозы.
Титр комплемента – наибольшее разведение комплемента которое вызывает полный лизис эритроцитов в присутствии гемолитической сыворотки. Рабочая доза комплемента – количество комплемента, которое выше титра на 25%.
Гемолитическая сыворотка готовится путём иммунизации кроликов 50% взвесью эритроцитов барана.
РСК Вассермана ставится для диагностики сифилиса с целью обнаружения противотрепанемных антител в сыворотке крови, а также для определения эффективности специфической терапии. Она основана на принципе РСК Борде-Жангу. Существенным отличием реакции Вассермана является применение двух диагностикумов: специфический (трепонемный) и неспецифический (кардиолипиновый).
Одновременно с основным опытом ставят 2 контроля: с заведомо отрицательной и заведомо положительной сыворотками.
Первый период сифилиса является серонегативным и характеризуется отрицательной реакцией Вассермана. У 50% больных реакция становится положительной не ранее чем через 2-3 недели после появления твердого шанкра. Во втором и третьем периодах сифилиса частота положительных реакций достигает 75-90%. После проведенного курса лечения реакция Вассермана становится отрицательной.
Реакция может быть ложноположительной при ряде заболеваний и состояний: беременность, онкопроцессы, туберкулез, после приема жирной пищи и алкоголя и др.
РИБТ – реакции иммобилизации бледной трепонемы применяется для серологичекой диагностики сифилиса. РИБТ позволяет дифференцировать биологически ложноположительные результаты реакции Вассермана и осадочных реакций от истинных, что делает ее незаменимой при распознавании скрытого сифилиса, диагноз которого может быть поставлен часто лишь на основании серологических исследований.
Ингредиенты:
· испытуемая сыворотка с противотрепанемными антителами (иммобилизины);
· антиген - взвесь бледных трепонем, полученный из яичка кролика зараженного сифилитическим орхитом;
· комплимент – сыворотка морских свинок в рабочей дозе;
В основе реакции лежит образование иммунного комплекса АГ-АТ-комплемент, что сопровождается активацией последнего и потерей подвижности T.рallidum. Учет реакции проводится микроскопированием препарата «раздавленной» капли.