Реакция преципитации (РП)

Преципитация и агглютинация – это довольно сходные реакции, которые различаются главным образом на основании физических свойств АГ. В первом случае он представлен в растворимой, во втором – в корпускулрной формах. В основе РП лежит образование преципитата в процессе реакции АГ-АТ. РП высоко специфична и чувствительна.

Выделяют 2 способа постановки РП (в растворах и в геле).

Постановка РП по Асколи с целью обнаружения антигена сибиреязвенных бацилл.

Для постановки реакции преципитации необходимо иметь: преципитиноген - гаптен B.anthracis (экстракт из тканей), преципитин (преципитирующая сибиреязвенная сыворотка) и физиологический раствор.

В качестве сибиреязвенного термопреципитиногена (гаптен) используют прокипяченые и профильтрованные водные экстракты органов и тканей трупного материала.

Реакцию кольцепреципитации ставят в узких преципитационных пробирках, в которые разливают преципитирующие сыворотки. Затем по стенке пробирки осторожно наслаивают преципитиноген. При положительной реакции на границе соприкосновения ингредиентов появляется мутное кольцо преципитации (рис.30).

При постановке реакции преципитации применяют следующие контроли:

а) антиген и физиологический раствор;

б) специфическая сыворотка и физ. раствор;

в) антиген и неспецифическая сыворотка.

РП в геле по Оухтерлони (реакция нейтрализации экзотоксина антитоксином) позволяет определять токсигенность дифтерийной палочки с помощью антитоксической сыворотки. В чашку Петри с питательной средой помещают полоску фильтровальной бумаги, пропитанной антитоксической противодифтерийной сывороткой и засевают исследуемыми культурами в виде штрихов (бляшек), перпендикулярных к полоске бумаги. В качестве положительного контроля берут заведомо токсигенную культуру. Инкубируют при 37°С в течение 24-48 часов. При наличии токсигенной культуры в месте взаимодействия токсина с антитоксином образуются линии преципитации (рис.31).

Реакция нейтрализации токсина антитоксином (РН) на мышах

РН токсина антитоксической сывороткой на животных основан на способности специфических антител – антитоксинов подавлять биологическую активность бактериальных экзотоксинов.

Компоненты (РН) на мышах, поставленной с целью идентификации С.рerfringens по токсигенности:

1) исследуемый материал (экзотоксин С.рerfringens);

2) диагностические сыворотки с антитоксинами против С.рerfringens, C. novyi, C. septicum, C. histolyticum и др.;

3) мыши – индикатор реакции.  

Диагностические сыворотки получают путем гипериммунизации кроликов анатоксинами - инактивированными эзотоксинами (формальдегидом), но сохранившими свои иммуногенные свойства, то есть способность индуцировать выработку защитных антител.

Принцип метода. К диагностическим видоспецифическим антитоксическим сывороткам добавляют исследуемого токсина, выдерживают в течение определенного времени и вводят внутрикожно животным. Учет реакции проводится по живой мышке.  

С. рerfringensпродуцирует шесть типов экзотоксина, различающихся по антигенной структуре (А, В, С, D, Е, F). Идентифицируют их с помощью диагностических типоспецифических сывороток.  

Реакция нейтрализации вирусов (РН) на мышах

Реакция нейтрализации вирусов основана на способности специфических вируснейтрализующих антител блокировать инфекционные, гемагглютинирующие, гемадсорбирующие, цитопатические, бляшкообразующие и др. свойства вирусов.  

Для постановки РН на мышах с целью идентификации вируса клещевого энцефалита необходимы следующие компоненты:

1) исследуемый вируссодержащий материал (кровь, ликвор, выделенная чистая культура вируса и др.);

2) диагностическая сыворотка с антителами против вируса клещевого энцефалита;

3) индикаторный объект: две белые мыши (опыт и контроль).

Принцип. Смесью (вируссодержащий материал + диагностическая сыворотка), выдержанной в течение определенного времени, заражают лабораторных животных. При (+) реакции, т.е. при нейтрализации вируса антителами индикаторные объекты продолжают нормально существовать, а в контроле – у мышей развиваются параличи, затем погибают.

Реакция торможения гемагглютинации (РТГА)  

РТГА относится к реакциям нейтрализации in vitro.

У некоторых вирусов (например, вируса гриппа) есть гемагглютинин, вызывающий агглютинацию эритроцитов различных животных в зависимости от вида вируса. При наличии в сыворотке антител  наблюдается ингибированные гемагглютинирующей активности вирусов (рис.32).

   Для постановки постановки РТГА с целью определения серотипа вируса гриппа А требуются следующие компоненты:

1) аллантоисная жидкость куриного эмбриона;

2) диагностические противогриппозные сыворотки с антителами против серотипов вируса гриппа А: А(Н1N1), А(Н2N2), А(Н3N2 и др.;

3) 3,5% взвесь куриных эритроцитов – индикатор реакции;

4) физиологический раствор.

Реакция ставится на стекле капельным способом. На стекло наносят по 1 капле диагностических сывороток и исследуемого материала, перемешивают, затем добавляют 1 каплю взвеси эритроцитов. При положительной реакции наблюдается гомогенное покраснение, а при отрицательной – выпадение хлопьев красного цвета (гемагглютинация).