Методические указания

Микробиологическая диагностика пищевых токсикоинфекций, вызванных Еscherichia spp., Salmonella spp., Proteus spp.

Бактериологическое исследование. Производят путем посева материала на дифференциально-диагностические и элективные среды (Эндо, висмут-сульфит агар и др.) для выделения чистой культуры сальмонелл и эшерихий, а также в конденсационную воду в пробирке со скошенным питательным агаром для выявления бактерий рода Рroteus. После инкубации посевов при 37 °С в течение 20-24 ч отмечают цвет колоний на чашках с дифференциальной средой и наличие "ползучего" роста, характерного для Рroteus spp., в пробирке со скошенным питательным агаром. Подозрительные колонии пересевают на скошенный питательный агар для получения чистых культур и одновременно ставят с ними ориентировочную реакцию агглютинации на стекле, используя смеси диагностических сывороток. На следующий день с чистой культурой ставят развернутую реакцию агглютинации с соответствующей монорецепторной сывороткой и делают посев на среды "пестрого" ряда. При выделении одного и того же серовара сальмонелл или эшерихий из организма больных людей и пищевого продукта делают окончательное заключение об этиологии пищевой токсикоинфекции - источнике заболевания. При наличии "ползучего" роста на скошенном питательном агаре из конденсационной воды петлей берут материал для приготовления препарата "висячая" капля с целью установления подвижности и для мазка, который окрашивают по методу Грама и микроскопируют. Затем выделяют чистую культуру, определяют биохимические и другие признаки и устанавливают вид: Р.vulgaris, P.mirabilis, P.morganii и P.rettgeri.

Оценка роли условно-патогенных микроорганизмов в этиологии пищевых токсикоинфекций должна быть строго аргументирована: а) бактериологическим, серологическим, эпидемиологическим и клиническим исключением сальмонеллезов, дизентерии, холеры; б) выделением идентичных штаммов условно-патогенных бактерий из рвотных масс, промывных вод желудка, испражнений, продуктов.

Микробиологическая диагностика стафилококковых пищевых интоксикаций

Материал для исследования: рвотные массы, промывные воды желудка, подозрительные пищевые продукты.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохимические и молекулярно-биологические исследования. Иммунохимическая диагностика основана на обнаружении энтеротоксина в исследуемом материале. Энтеротоксин Staphylococcus spp. экстрагируют изотоническим раствором хлорида натрия, затем определяют его присутствие и серологическую специфичность реакцией преципитации в геле с иммунными антитоксическими сыворотками А, В, С. Используют также латекс-агглютинацию, ИФА, РИА и др.

Бактериологическое исследование. С целью выделения чистой культуры стафилококка исследуемый материал, который может содержать жизнеспособные бактерии, засевают в чашки с ЖСА. Полученные по схеме чистые культуры проверяют на способность продуцировать энтеротоксины. Для эпидемиологического анализа массовых стафилококковых интоксикаций проводят фаготипирование выделенных культур с помощью набора стафилококковых фагов.

Биопроба. Для обнаружения энтеротоксина можно использовать биопробу - скормить изучаемый материал котятам-сосункам, у которых стафилококковый энтеротоксин вызывает рвоту и понос через 30-60 мин после скармливания.

Микробиологическая диагностика ботулизма

Материал для исследования: сыворотка крови, моча, испражнения, промывные воды желудка, остатки пищи или подозреваемые продукты (колбасы, мясные, рыбные, фруктовые, овощные консервы и др.).

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохимические и молекулярно-биологические исследования. Иммунохимическая диагностика основана на обнаружении ботулотоксина в исследуемом материале. С этой целью ставят реакцию Бойдена - РИГА с эритроцитами, нагруженными моновалентными антитоксическими противоботулиническими сыворотками типов А, В, Е. В качестве контроля используют нормальную сыворотку крови. Для выявления ботулотоксина могут быть использованы также ИФА и другие чувствительные серологические реакции.

Биопроба. Для обнаружения ботулотоксина в пищевых продуктах и определения токсигенности С.botulinum можно провести реакцию нейтрализации токсина на белых мышах. Для определения серотипа токсина реакцию ставят с моновалентными сыворотками типов А, В, Е. При нейтрализации токсина гемолитической антитоксической сывороткой мыши остаются живыми.