Эксперимент: «Анализ состава пигментов зеленых листьев методом тонкослойной хроматографии»

Пигментный аппаратфотосинтезирующих организмов может быть качественно охарактеризован с использованием метода тонкослойной хроматографии.

Шаг 1. Для начала вам нужно получить экстракт пигментов для работы. Для этого:

Вариант 1: возьмите небольшое количество молодой листвы, мелко нарежьте, поместите листву в стакан. Добавьте в стакан5-10 мл этанола, хорошо раздавитеперемешайте массу ложкой. Полученный экстракт слейте в отдельную емкость и оставьте на пару часов для концентрирования пигментов в объеме экстракта (часть спирта выпарится).

Вариант 2: в качестве экстракта можно использовать спиртовой раствор хлорофиллипта.

Шаг 2: Приготовление хроматографических полосок.

Вырезать из фильтровальной бумаги полоску(10 см х 2 см). С одного конца обрезать уголки под углом в 45 градусов.

Готовый экстракт пигментов капельно нанести на конец полоски с обрезанными краями, отступая 1-1,5 см от края. При этом необходимо дожидаться полного высыхания до нанесения новой капли во избежание растекания экстракта. Зафиксировать место старта посередине пятна обычным карандашом.

Шаг 3. Приготовление хромато графической камеры.

В прозрачную емкость налить смесь неполярного/полярного растворителя в соотношении 7:3, заполняя емкость на 0,5 см. Во избежание испарения элюента накрываем емкость (хромато графическую камеру)фольгой.

Шаг 4. Проведение хроматографии.

Аккуратно вертикально помещаем готовые полоски в емкость, заполненную парами хромато графической смеси. Фиксируем бумажные полоски скотчем к стенкам емкости. Закрываем фольгой.

Эксперимент проводят в течение 5-8 минут до видимого разделения пигментов. После достижения растворителем верхней границы полоски, бумагу достают, дожидаются полного высыхания, отмечают расположение пигментов относительно друг друга. Расстояние, которое полоса пигмента прошла от старта, являетсяхарактеристикой пигмента при данном соотношении растворителей, и она будет неизменна присоблюдении всех условия проведения хроматографии. Данная характеристика является ключевойдля исследований и помогает при аналитическом определении исследуемой смеси неизвестныхвеществ.