Цель занятия. Овладеть методами определения мочи,
ее на белок, сахар; в моче кетоновые те- ла, кровь, кровяные пигменты, желчные и желч- ные кислоты.
Материальное обеспечение. Индикаторная бумага, реактивы для определения белка, альбумоз, сахара, кетоновых
тел, кровяных пигментов, желчных пигментов и кислот; пробы мо- дающие и отрицательные реакции на са-
хар, кетоновые тела и т. п.
При исследовании химического состава мочи вначале опреде- ляют рН, затем ставят реакции на белок, сахар, кето- новые кровяные пигменты, миоглобин, индикан, желчные пигменты и кислоты.
рН мочи. Его устанавливают с помощью рН-метров или инди- каторной бумаги Индикатор-
ную бумагу погружают в мочу и, вынув, сравнивают с цветной шкалой, имеющей соответствующие цифровые обозначения рН. У здоровых животных реакция мочи зависит от состава кор- мов. У травоядных она слабощелочная или нейтральная, а у пло- тоядных умеренно кислая. У животных кислая моча бывает при болезнях, сопровождающихся лихорадками, голодании, почечной недостаточности, резкощелочная при уроциститах, расса-
|
|
сывании экссудатов и транссудатов, после рвоты.
Определение белка. Для установления содержания белка в моче ставят качественные и количественные пробы.
проб а с с у л ь ф о с а л и ц и л о в о й В пробирку наливают мл мочи кислой реак-
ции и добавляют капель раствора сульфосалици- ловой кислоты. При наличии белка образуется помутнение, не исчезающее при подогревании (при содержании альбумоз помут- нение исчезает при Проба с сульфосалициловой кислотой одна из самых чувствительных.
проб а с В пробирку берут 1,25 мл прозрачной мочи и до-
бавляют 5 мл раствора сульфосалициловой кислоты. Через 5 мин определяют оптическую плотность пробы в кюветах с рабочей шириной 5 мм при светофильтре нм (оранже- вый или красный светофильтр) против контроля.
Методика приготовления контроля следующая. В центрифуж- ную пробирку наливают 1,25 мл испытуемой прозрачной мочи и Добавляют к ней 5 мл раствора хлористого натрия. Оптическую плотность измеряют при тех же условиях, что и опытной пробы. Из оптической плотности опыта вычитают опти- ческую плотность контроля. Расчет проводят по калибровочному
139
графику, построенному на основании разведения стандартного альбумина в растворе хлористого натрия с концентра- цией 10, 50 и 100 в 100 мл раствора. Из каждого стандарт- ного разведения берут 1,25 мл и обрабатывают как опытные пробы.
|
|
Качественна я проб а с азотно й В пробирку с мл раствора азотной кислоты осто- рожно по стенке пробирки приливают мочу так, чтобы обе жид- кости не смешивались, а как бы соприкасались. В случае присут- ствия белка в моче на границе между жидкостями появляется белое кольцо (диск), представляющее собою слой белка, коагу- лированного азотной кислотой. Кольцо может появиться также при реакции кислоты с другими составными частями мочи. Так, моча, содержащая много уратов, образует кольцо, со- стоящее не из белка, а из уратов и расположенное не на границе между мочой и а в верхнем слое. При легком подогре- вании уратное кольцо исчезает. Присутствие муцина в моче так- же можег сопровождаться появлением кольца при постановке этой реакции, но оно находится значительно выше границы меж- ду мочой и реактивом и отличается рыхлостью.
Появление белка в моче называют в которой выделяют две группы патологического состояния: внепочечные и почечные При про- теинуриях белок к моче примешивается по ходу
путей (при уроцистите, уретрите, пиелонефрите, воспалении по- ловых При почечных протеинуриях белок в мочу попа- дает из почек. Почечные протеинурии бывают функционального и органического происхождения. Функциональные протеинурии появляются вследствие нарушения проницаемости капилляров почек. Их отмечают у коров в день родов, у новорожденных же- ребят в течение первых 3 дн. жизни. Органические это результат поражения паренхимы почек и увеличения проницаемости капилляров клубочков. протеинурию наблюдают при гломерулонефритах, нефрозах, застойных явле- ниях, интоксикациях, часто при инфекционных болезнях. Реналь-
и неренальная протеинурии нередко комбинируются.
Определение протеоз (альбумоз) в моче. Ставят биуретовую реакцию. К 3 мл подкисленной мочи добавляют около 1 мл на- сыщенного раствора хлористого натрия. Пробу кипятят, а затем в горячем виде фильтруют. К фильтрату добавляют объема концентрированного раствора гидроокиси натрия и несколько ка- сульфата меди. При положительной реакции по-
лучается красно-фиолетовое окрашивание.
в моче появляются при гнойных, некротических процессах, в послеродовом периоде, при болезнях, сопровождаю-
усиленным клеточным распадом.
1140
Определение сахара. Пробы мочи для исследования на угле- должны быть свежими. При хранении мочи в теплом
(не в холодильнике) глюкоза разлагается под действием фер-
бактерий, грибов.
Для определения сахара в моче пользуются пробами Бени- дикта, экспресс-методом и др.
Проб а Бенидикта. Реактив Бенидикта готовят следую- щим образом. В мерную колбу емкостью 1 л наливают 700 мл дистиллированной воды, добавляют 173 г цитрата натрия и 100 (или 200 г ' кристаллического) карбоната натрия. Смесь нагревают до растворения всех ее компонентов. Отдельно растворяют 17,3 г сульфата меди в 100 мл дистиллированной во- ды. Оба раствора смешивают в мерной колбе и после остывания объем их доводят дистиллированной водой до 1 л. Реак- тив сохраняется хорошо.
При постановке реакции в пробирку наливают 5 мл реактива и добавляют капель мочи. Пробу нагревают 2 мин на пла- мени или 5 мин в кипящей водяной бане. Оставляют пробирку для остывания в течение мин. При окрашивании содержимо- го пробирки в синий цвет пробу считают отрицательной. При на- личии сахара в моче 0,5 г в 100 мл) появляется зеленая, желтая или красная окраска пробы с соответствующим осадком на дне пробирки. Данная проба относится к полуколичествен- ным. Следует иметь в виду, что при содержании в 100 мл мочи от 0,05 до 0,5 г глюкозы цвет пробы зеленый, от 0,5 до 1 — желтый и красный.
|
|
Проб а Реактив Ниляндера (нитрат висму- 2 г, сегнетовая г, раствор гидроокиси нат-
100 раствор, хорошо сохраняющийся в склянке из темного стекла. При продолжительном хранении ре- актива перед постановкой опыта следует проверять его качество. Для этой цели в пробирку наливают реактив Ниляндера, разбав- ленный в 10 раз водой, и нагревают. Если реактив не испорчен, при кипении жидкость не должна темнеть.
С целью постановки пробы к мл реактива Ниляндера до- около 2 мл мочи и нагревают смесь в течение мин. При положительной реакции смесь мутнеет и приобретает окрас- ку от коричневой до черной. Проба выявляет 0,1 г сахара в
100 мл мочи. Однако при содержании в моче значительного ко- личества мочевой и салициловой кислот, гемоглобина проба дает ложноположительную реакцию.
Для экспресс-определения сахара в мо- используют реактивную бумагу
В нормальной моче содержится незначительное количество глюкозы, которое не удается обнаружить обычными качественны- реакциями. Если способность почечных канальцев реабсорби-
ровать глюкозу нарушается, то в моче появляется —
Физиологическая глюкозурия у животных возникает при даче им кормов, богатых углеводами, иногда она появляется в результате испуга, а также при беременности. Патологическая глюкозурия может быть при сахарном диабете, отравлениях жи- вотных соединениями тяжелых металлов, хлоралгидратом, пидаром и другими токсическими веществами, при дистрофии пе- чени, различных воспалительных процессах в головном и спин- ном мозге.
Определение кетоновых тел. Для их обнаружения применяют пробу Лестраде, которую выполняют с реактивом следующего состава: нитропруссид г, сульфат 20 г, карбонат натрия (безводный) — 20 г. Указанные вещества тща- тельно растирают в фарфоровой ступке, смешивают и хранят ре- актив в темной, хорошо закупоренной стеклянной банке.
При постановке пробы на белую бумагу или плитку насыпа- ют небольшое количество сухого порошка, который увлажняют каплями мочи. При наличии кетоновых тел реактив окраши- вается от розового до темно-фиолетового цвета. Окрашивание может наступить через мин.
|
|
В моче здоровых животных содержится мало кетоновых тел, и они не улавливаются пробой Лестраде. Положительная реак- ция на кетоновые тела в моче (кетонурия) встречается при
зе коров, кетонурии суягных овец, листериозе, продолжительных желудочно-кишечных расстройствах.
Определение крови и кровяных пигментов. Эритроциты в све- жей моче легко обнаружить под микроскопом. Кровяные пигмен- ты (гемоглобин и его метгемоглобин, сульфгемогло- бин, а также миоглобин выявляют с помощью спе- циальных проб.
Бензидинова я К 2 мл раствора пере- киси водорода добавляют капель свежеприготовленного насыщенного раствора бензидина в ледяной уксусной кислоте, размешивают и к смеси по каплям добавляют мочу. Окрашива- ние смеси вначале в а затем в синий цвет указывает на содержание в моче кровяных пигментов.
Моча здоровых животных дает отрицательную реакцию на кровяные пигменты. Положительная реакция может быть в ре- зультате появления в моче крови, гемоглобина, а также миогло- бина.
Нахождение крови в моче называют гематурией, которую ре- гистрируют при нефритах, нефрозонефритах, инфарктах почек, мочекаменной болезни, цистите, С-гиповитаминозе, распаде опу- - холей в мочевой системе.
Появление гемоглобина в моче именуют Она развивается у больных животных при гемоглобинемиях как.
142
болезней, острых отравлений, ожо- гов, протекающих инфекционных болезней.
реакци я дл я определени я м и о-
в 5 мл испытуемой мочи прибавляют 2,8 г кристаллического сульфата аммония, после чего смесь фильтру- ют. Если фильтрат имеет красно-коричневый цвет, это значит, что в моче имеется миоглобин, а если фильтрат не при- сутствует гемоглобин.
Определение индикана. В моче здоровых животных индикан содержится в незначительном количестве. Повышенное выделе-
,ние индикана с мочой называют Наблюдают ее при интенсивном гниении белковых веществ в кишечнике (непро- ходимость кишечника, а также при уси- распаде белков в организме опухоли и др.).
Индикан в моче выявляют с помощью пробы Обермайера.
В пробирку наливают 6 мл мочи и 6 мл раствора хлорного железа г хлорного железа растворяют в 100 мл кон- центрированной соляной кислоты). Через 5 мин добавляют
2 мл хлороформа, после чего содержимое пробирки встряхива- ют. При наличии индикана хлороформ в нижней части пробирки В нормальной моче билирубин содержится в малых количе-
ства индикана.
Определение желчных пигментов и кислот. Из желчных пиг- ментов в моче могут присутствовать билирубин и
тела.
Проб а билируби н по В пробирку берут мл исследуемой мочи и наслаивают водный раствор йода (1 г кристаллического йода, 2 г калия йодида и 30 мл дистилли- рованной воды) или спиртовой раствор йода. При поло- жительной реакции на границе между слоями жидкостей ляется зеленое кольцо.
В нормальной моче билирубин содержится в малых количе- ствах, не определяемых существующими реакциями. При обна- ружении билирубина в моче говорят о (при ме- ханической и паренхиматозной
Проб а н а
тел а по Богомолову. В химический стаканчик берут
15 мл мочи и добавляют мл насыщенного раствора сульфа- та меди. В случае помутнения пробы в нее вносят несколько ка- пель концентрированной соляной кислоты до просветления. Че- рез 5 мин к содержимому стаканчика добавляют мл хлоро- форма и взбалтывают. При наличии тел слой хлороформа окрашивается от розово-красного до медно-красного цвета.
С мочой здоровых животных выводится незначительное коли- чество уробилиногеновых тел, которые при стоянии мочи перехо-
дят в тела. Повышенное количество тел называют
билинурию отмечают при гемолизе в кровяном рус- ле, напрамер при болезнях, отравлениях ге- молитическими ядами, болезнях печени и кишечника. Полное от- сутствие тел указывает на механическую
туху.
Количество желчных кислот в моче значительно увеличивает- ся при механической и паренхиматозной желтухах.