Цель занятия. Овладеть методиками определения резервной щелочности и каротина в или сыворотке крови и научиться давать диагностическую результатам анализов.
Материальное обеспечение. бюретки (на 5 и 10 мл), градуированные пипетки (на 0,2, 1; 2; 5 и 10 мл), глазные пипетки, стеклянные палочки, сдвоенные колбы с общим объемам около 80 и от- верстиями диаметром 116, 18 или 20 мм по величине резиновых пробок № 16,
18 или 20 (новые пробки перед употреблением кипятят в растворе гидроокиси калия, прополаскивают несколько раз а затем дистиллированной крови.
Реактивы для определения резервной щелочности: 0,1 н. раствор гидрооки- си натрия, 0,01 н. раствор гидроокиси н. раствор серной кислоты, 0,01 н. раствор серной кислоты, раствор серной кислоты, спиртовойрастворфенолфталеина.
Реактивы для определения каротина: этиловый спирт, петролей- эфир или бензин марки Б-70, основной стандартный раствор калия (360 мг калия, дистиллированной до 500 мл), рабочий раствор калия (5 мл основного раствора калия бихромата и 5 мл
|
|
дистиллированной
Определение резервной щелочности крови. Для определения показателей, характеризующих кислотно-щелочное равновесие, применяют метод Аструпа модифицированный — Андерсеном (1963) и определить рН, парциальное давление двуокиси углерода щелочной резерв (способ- ность связывать истинный бикарбонат, стандартный бикар- бонат, буферные основания и общее содержание двуокиси угле- рода плазмы. Состояние кислотно-щелочного равновесия оцени- вают по результатам определения щелочного резерва плазмы крови по Ван-Слайку или сыворотки (плазмы) по И. П. Кондра- хину. Сыворотку |(плазму) хранят под вазелиновым маслом.
У здоровых животных щелочной резерв плазмы крови при установлении его по Ван-Слайку находится в пределах
У крупного рогатого —
у кур —
Для определения резервной щелочности сыворотки крови по в одну половину колбы вносят 0,5 мл сыворотки
(или плазмы) крови, причем выдувание остатков жидкости из пипетки не допускается; плотно закрывают пробкой. Во вторую половину колбы берут 2 мл 0,01 н. раствора гидроокиси натрия и закрывают пробкой. Затем открывают первую половину колбы и к находящейся там сыворотке крови добавляют 1 мл раствора серной кислоты и быстро закрывают пробкой. Враща- тельными движениями тщательно смешивают сыворотку с кисло- той. За время прохождения реакции смешивание повторяют
|
|
4 раза.
В контрольную колбу вносят 2 мл 0,01 н. раствора гидроокиси натрия и плотно закрывают пробкой. Во вторую половину спа- ренной колбы берут 1 мл 5%-ного раствора серной кислоты и также закрывают пробкой. Перед закрытием отверстий колбы пробки увлажняют дистиллированной водой.
Для большой точности каждый образец сыворотки исследуют в двух спаренных колбах. Контрольный опыт ставят в трех сдво- енных колбах.
Через ч (допустимо до 12 ч) открывают колбы, в кото- рых находится раствор гидроокиси натрия, вносят одну каплю
1 раствора фенолфталеина, смешивают (появ- ляется красная окраска). Затем жидкость в колбе титруют 0,01 н. раствором серной кислоты до полного обесцвечивания, что происходит при рН 8. Титрование следует проводить осторожно и с одинаковой быстротой во всех пробах и контроле.
Расчет резервной щелочности (X, проводят по формуле где количество
0,01 н. раствора серной кислоты, израсходованное на титрование опытной пробы, мл; количество 0,01 н. раствора серной кис- лоты, израсходованное на титрование контрольной пробы, мл; фактор пересчета 0,01 н. раствора серной кислоты на при данной реакции; коэффициент для перечисления взя- того для анализа количества сыворотки (плазмы) крови (0,5 мл) на 100 мл.
У крупного рогатого скота резервная щелочность сыворотки крови по методике составляет а плазмы %
При нарушениях кислотно-щелочного равновесия может раз- виться ацидоз (избыток кислот или недостаток оснований) или (избыток щелочных веществ). Если ацидоз или алкалоз
175
протекают без сдвигов рН, то их называют со сдвигом некомпенсированными Ацидоз и алкалоз могут быть газовыми (дыхательными) и негазовыми (метаболически-
Газовый ацидоз возникает вследствие задержки в угольной кислоты как результат гиповентиляции легких (брон- хиальная астма, Газовый алкалоз наблюдают при выраженной гипервентиляции легких (перегревание организ- ма,
Метаболический алкалоз устанавливают при избыточном скоплении в организме оснований при рвоте (потеря соляной кис- лоты), фибринозной пневмонии, селикозе, перекорме сахарной свеклой, пироплазмозе и др Метаболический ацидоз развивается при скармливании животным кислых или закисших кормов, обильном кормлении концентратами, скудном кормлении, плохой вентиляции помещений, недостатке инсоляции и моциона, рахите и остеодистрофии, атониях преджелудков, бронхопневмониях, ли- хорадочно-воспалительных процессах, кетозах, послеродовом па- резе, диспепсиях, сердечно-сосудистой и дыхательной недостаточ- ности, лучевой болезни, нефритах, сахарном диабете, эклампсии и т. д.
Определение содержания каротина в сыворотке крови (по В. Ф. и Л. А. Кудрявцевой). В пробирку вносят
1 мл сыворотки крови и 3 мл этилового спирта, тща- тельно смешивают стеклянной палочкой. Добавляют 6 мл петро- лейного эфира (или бензина), энергично встряхивают не менее 2 мин и осторожно приливают по стенке пробирки 0,5 мл дистил- лированной воды, оставляют стоять до четкого разделения нической и водяной фаз. После этого осторожно сливают
5 мл каротина и переносят в кювету.
в кюветах 1 см при синем против петролейного эфира (бензина) Одновременно колоримет- рируют рабочий стандартный раствор бихромата калия.
Содержание каротина (X, мл) находят по формуле
Х =
|
|
Б
где А — плотность пробы; Б — стаадартного раствора; для каротина в на 100 мл.
Определение каротина (X, мг/л) проводят также по формуле
Х =
Б
где А и Б — то же, что и в предыдущей формуле; — коэффициент
в иг 1 л.
176
Содержание каротина в сыворотке крови здоровых животных составляет мл): у крупного рогатого
со-
у Количество каротина находит- ся в пределах у крупного рогатого —
у кур
Уменьшение содержания каротина в крови называют
Недостаток каротина и витамина А служит одной из причин снижения организма, развития у молод- няка диспепсии, бронхопневмонии, кератоконъюнктивита, отста- вания в росте; у снижения продуктивности, аборта, за-
держания последа, субинволюции матки, нарушения половых циклов; у быков-производителей — изменения у возникновения уродств у поросят.
Заняти е 28 ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЩЕГО
ФОСФОРА И МАГНИЯ
В СЫВОРОТКЕ КРОВИ
Цель занятия. Научиться определять в крови количество обще- го кальция, неорганического фосфора и магния и давать клиническую оценку результатам исследования
Материальное обеспечение. микробю-
ретка (на 2 мл), центрифужные пробирки, бутылки, градуи- рованные микропипетки и пипетки (на 0,1; 1,5 и 10 мл); сыворотка
Реактивы для определения кальция (готовят на
и хранят в бутылках) 0,1 н раствор калия, инди- каторная смесь (1 г и 100 г нитрата калия), 0,1 раствор три- лона Ь (37,21 г Б и воды до 1 л); М раствор Б (1 мл 0,1 М раствора трилона Б и воды до 100 мл), стандартный раствор кальция (высушенный при в течение 24 ч химически чистый бонат кальция 2,497 г 8 мл соляной и воды до
|
|
1 л), рабочий стандартный раствор кальция (1 мл основного раствора каль- ция и 9 мл воды, в 1 мл раствора мг кальция)
Реактивы для фосфора раствор реактив на фосфор, который готовят смешиванием 500 мл
раствора ванадата аммония (1,17 г ванадата аммония растворяют в 250 мл горячей дистиллированной воды, добавляют 14 мл соляной кислоты, охлаждают до и доводят водой до объема 500 мл), 1000 мл н соляной кислоты (205,7 мл
ной соляной доводят дистиллированной водой до объема 1 л) и 1000 мл раствора молибдата аммония (35,3 г молибдата аммония растворяют в л горячей дистиллированной охлаждают до ком- натной температуры и дистиллированной водой до объема 1 ре- актив в темном прохладном месте не менее 3 основной стан- дартный раствор фосфора (4,394 г до постоянной мас-
сы в эксикаторе над серной и воды до л; добав- ляют 5 мл хранят в холодильнике до 1 года; в 1 мл
12 Заказ № 1227 177
1 фосфора); рабочий (5 мл ос- стандартного раствора фосфора и воды до 100 мл;
в 1 мл раствора содержится 0,05 мг
для определения магния: раствор поливинилового раствор титанового раствор титанового
желтого (1 мл раствора титанового желтого и
воды до 50 мл); раствор гидроокиси натрия; основной стандартный раствор (8,458 г и дистиллированной воды до 1 л); рабо- чий стандартный раствор магния (1 мл основного раствора магния и дистилли- рованной воды до 200 мл; в 1 мл раствора мг магния).
Определение содержания общего кальция в сыворотке крови (по Вичеву и В пробирку берут 1 мл 0,1 н. раство- ра гидроокиси калия и несколько крупинок индикаторной появляется бледно-розовая окраска. Если возникает зеленова- тая флуоресценция (вследствие присутствия в растворе следов то титруют 0,001 М раствором трилона Б до появления бледно-розовой окраски. При добавлении 0,1 мл рабочего стан- дартного раствора кальция появляется зеленоватая флуоресцен- ция. Титруют 0,001 М раствором трилона Б до бледно-розовой окраски. В пробирку вносят ОД мл испытуемой сыворотки кро- ви. После появления флуоресценции титруют 0,001 М раствором трилона Б до ее исчезновения.
Содержание кальция в сыворотке (X, мл) находят по формуле
• А
Б
где 0,001 М раствора трилона Б, на вание сыворотки, мл; Б — количество 0,001 М раствора трилона Б, израсходо- ванное на рабочего стандартного раствора кальция, мл; 0,01 личествокальция, в0,1мл стандартного
мг; сыворотки, взятое для исследования, мл; 100 — коэффициент для перечисления количества кальция на 100 мл.
Содержание кальция (X, ммоль/л) определяют также по муле
А
Л • •
Б
где А и же, что и в предыдущей формуле; 40,08 — относительная моле- масса кальция; 1000 — коэффициент для пересчета.
У взрослых здоровых животных количество общего кальция в сыворотке находится в следующих пределах (мг/100 у крупного рогатого овец — коз —
у
Для пересчета количества общего кальция в единицы СИ концентрацию вещества в мг/100 мл умножают на ко- 0,25.
В норме количество общего кальция в сыворотке крови со- ставляет (ммоль/л): у крупного рогатого
коз лошадей сви- собак у кур
Уменьшение количества общего кальция в сыворотке наблюдают при голодании, рахите, остеодистро- фии, уремии, хронических заболеваниях послеродовом па- резе, бронхопневмонии, экссудативном плеврите, анемии, лейко- зах, диабете, остро протекающих болезнях, хроническом сепсисе, тетании, гипопаратиреозе, остром панкреатите, контагиозной плевропневмонии и др.
Увеличение общего кальция может быть алиментарного происхождения, при остеодистрофии, деформи- рующем артрите, остеомах, гиперпаратиреозе, сердечной недо- статочности, перитоните, гангрене, желтухе и т. д.
Определение содержания неорганического фосфора в сыво- ротке крови (по В. и Л. А. Кудрявцевой). В центрифужную пробирку вносят 2,5 мл во- ды, 0,5 мл сыворотки крови, 2 мл раствора трихлорук- сусной кислоты, хорошо перемешивают и центрифугируют 10 мин яри В другую пробирку наливают 2,5 мл прозрачного центрифугата, 2,5 мл реактива на фосфор и через 20 мин коло- риметрируют с синим светофильтром против воды в 10 мм кюветах.
Одновременно таким же образом ставят реакцию с рабочим стандартным раствором фосфора, но вместо сыворотки наливают 0,5 мл стандартного раствора.
Содержание неорганического фосфора в сыворотке (X,
мл)
где А — плотность пробы с сыворотки Б — оптическая плотность пробы с рабочим стандартным раствором фосфора количество взятое для колориметрического ис- следования, мл; коэффициент для пересчета фосфора на
100 мл сыворотки; количество фосфора во взятом для анализа объ- еме рабочего стандартного раствора
В сыворотке крови взрослых животных содержание неорга- нического фосфора следующее (мг/100 мл): у крупного рогатого скота — овец лошадей 5,5; собак у
Для пересчета количества неорганического фосфора в едини- цы СИ (ммоль/л) концентрацию фосфора (мг/100 мл) нужно ум- ножить на коэффициент 0,323.
Содержание неорганического фосфора в сыворотке крови у здоровых животных составляет у крупного рогатого
скота коз лоша-
у кур—
Уменьшение содержания неорганического фосфора в сыворот- ке бывает при рахите, остеодистрофии, гипер-
неполноценном кормлении
Увеличение содержания неорганического фосфора в сыворот- ке наблюдают при заживлении переломов костей, болезнях почек, гипопаратиреозе, желтой атрофии пече- ни, лейкозах
Определение содержания магния в сыворотке крови (по Спе- ру). Для анализа берут три пробирки В первую пробирку (про- ба) вносят 2,8 мл дистиллированной воды, 0,2 мл сыворотки, 0,5 мл 0,1% ного раствора поливинилового спирта и 1 мл ного раствора титанового желтого Во вторую пробирку
берут 2 мл воды, 1 мл рабочего стандартного раство- ра магния, 0,5 мл раствора поливинилового спирта и
1 мл 0,01% ного раствора титанового желтого В третью и чет- вертую пробирки (контроль) вливают по 3 мл воды, 0,5 мл раствора поливинилового спирта и 1 мл раствора титанового желтого
Во все четыре пробирки добавляют по 1 мл 7,5% ного раство- ра гидроокиси натрия После прибавления растворов их смеши- вают, выжидают 5 мин и колориметрируют при зеленом свето- фильтре (540 нм) в 10 мм кюветах против контроля
Содержание магния в сыворотке крови (X, мл) опре- деляют по формуле
0,2 ' ' '
где оптическая плотность пробы, оптическая плотность стандар- та, количество магния, взятое для анализа в коли- чество сыворотки, взятое для анализа, мл, 100 — коэффициент на 100 мл
Содержание магния в сыворотке крови ммоль/л) находят также по формуле
х=-
0,2 24,312
1,028
где 0,005 и же, что и в предыдущей формуле,
фициент для перечисления (на 1 ч), относительная молекулярная масса магния
Содержание магния в сыворотке здоровых животных нахо- дится в следующих пределах (мг/100 мл) у крупного рогатого
овец
собак — у кур —
Для пересчета количества магния в единицы СИ (ммоль/л)
180
его содержание мл) умножают на 0,411 Содержание магния в сыворотке составляет (ммоль/л) у крупного рогатого скота овец лошадей сви-
собак кур
Увеличение количества магния в сыворотке крови
может быть при острой и хронической почечной недоста- точности, болезнях печени и др
Уменьшение содержания магния в сыворотке крови
наблюдают при пастбищной тетании у поно- белково минеральном голодании, циррозе печени и т д