Чтобы охарактеризовать вирусные белки

Единственный способ доказать, что белок является составной частью объекта, - это
получить его из этого объекта или, когда объект очень мал, как в случае
вирусов, из материала, состоящего из очищенных вирусных частиц. Если материал
содержит примеси, которые являются белками или содержат белки, невозможно
определить, какие из них являются вирусными, а какие нет. Однако только после того, как вирусные
белки будут охарактеризованы, их можно будет использовать в качестве антигенов в
тестах на антитела.

Для характеристики вирусного генома

Что касается вирусных белков, единственный способ доказать, что участок РНК является вирусным,
- это получить его из материала, который не содержит ничего, кроме вирусных частиц.
Если материал содержит примеси, примеси не должны включать РНК. Тогда
и только тогда можно использовать РНК и ее комплементарную ДНК (кДНК) в качестве зондов и
праймеров для геномной гибридизации и исследований ПЦР.

Действовать как золотой стандарт для тестов на антитела

Реакция вируса или вирусного белка с антителом, присутствующим в
сыворотке крови пациента, не доказывает, что антитело индуцируется
вирусом или вирусным белком или направлено против него. То есть это не доказывает, что реакция
специфична. Это связано с тем, что существуют значительные препятствия, мешающие
интерпретации реактивности антитела / антигена, включая неспецифическую
стимуляцию, перекрестную реактивность или и то, и другое. Перекрестная реактивность возникает в результате
взаимодействия молекул антител, даже моноклональных антител, не только с индуцирующим
антигеном, но и с другими антигенами. Действительно, бывают случаи, когда
«перекрестно-реактивные антитела могут иметь более высокое сродство с антигенами других групп».
чем индуцирующий антиген. Даже антигены, которые различаются по большей части своей структуры,
могут иметь одну детерминанту, и тогда моноклональное антитело, распознающее этот сайт,
даст 100% перекрестную реакцию. Примером может служить реакция аутоантител при
волчанке как с ДНК, так и с кардиолипином... Следует подчеркнуть, что наличие
«детерминанты» не означает, что антигены содержат идентичные
химические структуры, а скорее, что они имеют химическое сходство, которое может
не совпадать. хорошо изучено, например, распределение поверхностных зарядов».
Поскольку поликлональные антитела представляют собой составы моноклональных антител, эти факты в
равной степени, если не в большей степени, применимы к поликлональным антителам. Эти факты были
широко используется в клинической медицине для диагностики таких заболеваний, как
сифилис и инфекционный мононуклеоз. При этих заболеваниях T. pallidum и
вирус Эпштейна-Барра вызывают появление антител, реагирующих с
белками бычьего сердца и эритроцитами овцы и лошади. Однако это не означает, что
пациенты «инфицированы» волчьим сердцем или красными кровяными тельцами лошади, и
что заболевания вызываются этими агентами. Единственный способ определить
специфичность реакции антитело / антиген - это использовать независимый метод,
золотой стандарт для доказательства наличия или отсутствия антигена. Единственный возможный
золотой стандарт для теста, подтверждающего вирусную инфекцию, - это сам вирус.
То есть выделение / очистка вируса.

МЕТОДЫ ВЫДЕЛЕНИЯ / ОЧИСТКИ РЕТРОВИРУСПОДОБНЫХ ЧАСТИЦ

До 1950-х годов ретровирусы выделяли / очищали фильтрованием, хотя
этот метод был менее чем удовлетворительным. С развитием электронного
микроскопа, по-видимому, для некоторых ретровирологов обнаружение
ретровирусоподобных частиц было сочтено достаточным для доказательства существования
ретровируса. Однако другие ученые, включая известного ретровиролога
Дж. У. Берда, признали, что клетки, в том числе неинфицированные, в различных
условиях ответственны за образование гетерогенного массива
частиц, некоторые из которых выглядят как ретровирусы. Бирд подчеркнул:
«идентификация, характеристика и анализ подлежат хорошо известным
дисциплины установлены интенсивными исследованиями, и возможности
никоим образом не исчерпаны. Как ни странно, именно в этой области
видны наиболее частые недостатки. Иногда они связаны с уклонением от
дисциплинарных мер или их применением к неподходящим материалам. Как и предполагалось,
большая часть интереса к более утомительным аспектам выделения и
анализа частиц была отвлечена более простыми и, несомненно, информативными процессами
электронной микроскопии. В то время как много можно узнать быстро с инструментом, он
, тем не менее ясно, что результаты, полученные с ней никогда не сможет заменить, и
слишком часто может скрывать, необходимость критических фундаментальных исследований, которые
зависят от доступа к однородным материалам»(курсив наш).

К 1970-м годам было достигнуто общее согласие о том, что «вирионы RTV
[ретровирусов] имеют характерную плавучую плотность, и центрифугирование до
равновесия по градиентам плотности является предпочтительным методом очистки
RTV». Не идеален и метод разбивки градиентов плотности.
Вещества, отличные от ретровирусов, могут иметь такую ​​же плотность. Вот почему на
встрече, состоявшейся в Институте Пастера в 1972 году, Франсуаза Барре-Синусси и
Жан-Клод Шерманн подчеркнули, что для того, чтобы заявить об очистке ретровирусоподобных
частиц с использованием градиентов плотности сахарозы, абсолютно необходимо доказать
с помощью электронного микроскопа, что полоса 1,16 г / мл не содержит ничего другого
но частицы без «видимых различий во внешнем виде».