Микологический метод

Микологический метод используется в том случае, когда спороношения возбудителей отсутствуют, а по особенностям грибницы невозможно установить вид возбудителя. Поэтому метод заключается в выделении гриба из пораженных частей растений, изоляции его и выращивании на искусственной или естественной среде. Микологический метод может быть осуществлен двумя способами:

• влажной камеры,

• чистой культуры.

Способ влажной камеры основан на способности грибницы, находящейся внутри тканей растения во влажных условиях прорастать наружу и образовывать спороношения. Влажную камеру можно изготовить из чашки Петри, на дно которой кладут кружок фильтровальной бумаги, равный по диаметру дну чашки. Влажную камеру стерилизуют в сушильном шкафу. Чашки можно также стерилизовать кипятком или спиртом. Фильтровальная бумага смачивается дистиллированной или охлажденной кипяченой водой. Для устройства влажной камеры можно использовать мелкие тарелки, блюдца и куски оконного стекла. Объекты исследования (хвою, листья, кусочки древесины и пр.) после стерилизации раскладывают на дно влажной камеры, которые помещают в термостат или оставляют в помещении при температуре 20-25⁰С. Способ влажной камеры благодаря своей простоте находит широкое применение при диагностировании многих болезней: инфекционного полегания, шютте, поражения древесины синевой и т.д.

Способ чистой культуры более сложен и требует определенных навыков. Способ дает возможность выделить патогена из больного растения, изолировать от посторонних микроорганизмов и вырастить в чистом виде до появления спороношений или хорошо выраженных культуральных признаков. Для получения чистой культуры и поддержания ее в состоянии жизнеспособности используют питательные среды (искусственные или естественные, твердые или жидкие). Чаще всего используют агаризованные среды разного состава, предварительно разлитые в горячем виде в колбы, чашки или пробирки. Рецепты приготовления питательных сред приводятся в специальных пособиях по технике и методам фитопатологических исследований. Перед использованием питательные среды стерилизуют в автоклавах или в аппарате Коха. Вообще использование способа чистой культуры требует неукоснительного соблюдения условий стерильности на всех этапах работы (подготовка посуды, питательной среды и растительных объектов, выделение чистых культур).

Выделение чистых культур грибов из различных сред обитания имеет свои особенности. Так, возбудителей некрозно-раковых болезней, трахеомикозов, гнилей выделяют из пораженных тканей путем посева простерилизованных кусочков коры или древесины на питательные среды или из спор и мицелия, полученных во влажной камере.

Подробнее эти вопросы можно посмотреть в специальной литературе, приведенной в библиографическом списке.