Серологический метод

Биологический метод

На производстве, а часто и при научных исследованиях применяют биологический метод. Его используют при изучении устойчивости отдельных растений к возбудителям болезней, при выведении новых гибридов, исследовании химической обработки растений и т.п. Этот метод заключается в искусственном заражении (инокуляции) здоровых растений природным материалом (спорами, мицелием, экссудатом бактерий) или чистой культурой возбудителя болезни с последующим установлением процента поражения, интенсивности развития и других особенностей болезни.

Так, самым надежным способом доказательства вирусной патологии растений служит искусственное заражение, которое осуществляется различными методами:

1. Механическая инокуляция

• частицы зараженных растений втирают в поверхность здорового растения;

• заражение из пульверизатора с добавлением к инокулюму тонко измельченного абразива (карбид кремния, окись алюминия и т.д.). Действие абразивов заключается в более эффективном повреждении растений при инокуляции.

2. Заражение посредством прививок способами, принятыми в растениеводстве (например, пересадка привоя без корневой системы и прививки сближением). Симптомы заболевания у ранее здоровых растений сначала появляются на молодых листьях и верхушке побега.

3. Заражение через повилику, которая обвивает растения и посредством гаусторий внедряется в их ткани (вирусы перемещаются по стеблю повилики от больного растения к здоровому. Повилику обычно применяют для передачи таких вирусов, которые не удается инокулировать механически или с помощью переносчиков, а также в тех случаях, когда нельзя осуществить прививку растений (когда растения таксономически далеки друг от друга).

4. Заражение растений переносчиками вирусов (переносчик находится в контакте с больными растениями, а затем переносится на здоровые). При этом необходимо подобрать оптимальное время, для того чтобы переносчик успел поглотить достаточное количество пищи, содержащей вирус, и затем заразить им другое растение. Для оценки способности переносчиков передавать вирус используют подходящие тест- растения, или растения- индикаторы. Симптомы многих вирусных болезней, передаваемых переносчиками, питающимися на листьях или побегах, легко заметны.

Известно, что между фитопатогенными бактериями существует настолько большое сходство, что часто их нельзя различить, используя традиционные методы идентификации. Некоторые виды отличаются друг от друга по своим биохимическим свойствам настолько незначительно, насколько малы различия между штаммами одного вида. Поэтому очевидно, что только знание биохимии и морфологии бактерий, кроме изучения их патогенности, недостаточно. Они должны быть дополнены серологическими характеристиками, а иногда и тестами на чувствительность к фагам. Следовательно, для успешного разрешения проблемы диагностики возбудителей бактериальных и в наименьшей степени вирусных и микоплазменных болезней возникла необходимость использовать серологические методы медицинской микробиологии, для того, чтобы любой неизвестный патоген можно было идентифицировать в сравнительно короткое время.

Серологические методы основаны на свойствах животного организма реагировать на введение в его кровь инородных веществ. При этом происходят специфические реакции между белками крови животных и введенными белками иного происхождения (антигены).

При введении белка вируса (антигена) в кровь животного в ней образуются специфические вещества (антитела), которые инактивируют чужеродный организму животного белок растительного вируса. В растительной вирусологии чаще используют реакцию осаждения, разновидностью которой является капельный метод, разработанный М.С.Дуниным и Н.П.Поповой. Смешивают каплю сока растения с каплями контрольной сыворотки и сыворотки, содержащей антитела к изучаемому вирусу (антисыворотка). Присутствие вируса обнаруживается при выпадении осадка в капле антисыворотки. Обычно в качестве иммунизированных животных используют кроликов, а приготовленную сывортку консервируют и используют в течение длительного времени.

В настоящее время в вирусологических лабораториях используют и более высокочувствительные приемы серодиагностики -иммуноферментный метод, латекс-тест и др.