А н я т и е 22. Химическое исследование мочи

Цель занятия. Освоить методы определения реакции мочи, научиться исследо­вать мочу на белок, альбумозы, сахар, кетоновые тела, кровь, кровяные пигменты, миоглобин, индикан, желчные пигменты и желчные кислоты.

Объекты исследования и оборудования. Пробы мочи, дающие положи­тельные и отрицательные реакции на белок, альбумозы, сахар, кетоновые те­ла и т. п.

Индикаторная бумага, рН-метры, фотоэлектроколориметр, реактивы для оп­ределения белка, альбумоз, сахара, кетоновых тел, кровяных пигментов, индика-на, желчных пигментов и кислот.

Химическое исследование мочи, которое начинают с установ­ления ее рН, включает в себя пробы на белок, альбумозы, сахар,

кетоновые тела, кровяные пигменты, миоглобин, индикан, желч­ные пигменты и желчные кислоты.

Определение рН. Реакцию мочи определяют с помощью рН-мет-ра или индикаторной бумаги («Рифан», «Фан» универсальная), а также полифункциональных полосок-индикаторов, посредством которых устанавливают также и другие характеристики мочи (на­личие белка, глюкозы, кетоновых тел, уробелина, билирубина, ас­корбиновой кислоты, следов крови и т. п.).

В норме рН мочи зависит от состава кормов. У травоядных жи­вотных реакция щелочная или нейтральная, у плотоядных уме­ренно кислая. Резко кислую реакцию наблюдают при заболевани­ях, сопровождающихся лихорадкой, а также при голодании, недо­статочности почек; резко щелочную —при циститах, рассасыва­нии экссудатов и транссудатов, после рвоты.

Определение белка. Белок в моче выявляют качественными и количественными пробами.

Качественная проба с сульфосалициловой кислотой. Это одна из самых чувствительных проб. В пробирку вносят 2...3 мл мочи с кислой реакцией, затем 5...6 капель 20%-го раствора сульфо­салициловой кислоты. При наличии белка в моче в содержимом пробирки отмечают помутнение, не исчезающее при подогрева­нии (при наличии альбумоз появившееся помутнение исчезает при подогревании).

Качественная проба с азотной кислотой. В пробирку с 1...2 мл 50%-го раствора азотной кислоты осторожно приливают по стенке мочу так, чтобы эти две жидкости не смешивались. В слу­чае присутствия белка в моче на границе между жидкостями по­является белое кольцо (диск), представляющее собой слой бел­ка, свернувшегося под воздействием азотной кислоты. Кольцо может появиться также при реакции кислоты с другими состав­ными частями мочи: например, моча, богатая уратами, также дает кольцо, состоящее из мочевой кислоты и уратов, но оно появляется не на границе азотной кислоты и мочи, а выше. При легком подогревании уратное кольцо исчезает. Кроме того, кольцо образуется в результате осаждения муцина, но значи­тельно выше границы между мочой и реактивом и оно не так резко выражено.

Количественная проба Робертса — Столъникова. В пробирку вносят 2 мл 50%-го раствора азотной кислоты и осторожно наслаивают такое же количество исследуемой мочи. Появление серого кольца на границе между кислотой и мочой в течение первых 2 мин указывает, что белка в пробе содержится более 0,033 г/л. В этом случае мочу разводят дистиллированной во­дой. Количество белка вычисляют, умножая 0,033 на степень разведения мочи. Содержание белка в моче при ее различных разведениях проще вычислять с помощью специальной табли­цы (табл. 5.1).

5.1. Определение содержания белка в моче, разведенной в различных соотношениях

Моча, раз­веденная 1: 10 (3 мл мо­чи + 27 мл дистилли­рованной воды), мл

Количест­во добав­ляемой дистилли­рованной воды, мл

Количест­во добав­ляемой дистилли­рованной воды, мл

Количе­ство белка в моче, г/л

Моча, раз­веденная

Количест­во белка в моче, г/л

Разведе­ние мочи

Разведе­ние мочи

1: 10 (3 мл мо­чи + 27 мл дистилли­рованной воды), мл

	—	1:10	0,33				:90	2,97
		1:15	0,50					3,30
		1:20	0,66				ПО	3,63
		1:25	0,83					3,96
		1:30	0,99					4,29
		1:35	1,16					4,95
		1:40	1,32					5,61
		1:50	1,65					5,94
		1:60	1,98					6,60
		1:70	2,31					8,25
		1:80	2,64					9,90

Количественная проба с сульфосалициловой кислотой. В пробир­ку вносят 1,25 мл прозрачной мочи и добавляют 5 мл 3%-го раст­вора сульфосалициловой кислоты. Через 5 мин определяют опти­ческую плотность пробы в кюветах с рабочей шириной 5 мм при светофильтре 650...590нм (оранжевый или красный светофильтр) против контроля, который готовят следующим образом.

В центрифужную пробирку вносят 1,25 мл исследуемой про­зрачной мочи и добавляют 5 мл 0,9%-го раствора хлорида натрия. Оптическую плотность контрольной пробы измеряют при тех же условиях, что и плотность опытной. Из оптической плотности опыта вычитают оптическую плотность контроля. Показатель рас­считывают по калибровочному графику, который строят на ос­новании разведения стандартного альбумина 0,9%-м раствором хлорида натрия с концентрацией 5, 10, 50 и 100 мг в 100 мл раст­вора. Из каждого стандартного разведения берут 1,25 мл и обра­батывают как опытные пробы.

Появление белка в моче называется протеинурией. Последняя по своему происхождению может быть внепочечной (нереналь-ной) и почечной (ренальной).

При внепочечных протеинуриях белок к моче примешивается по ходу мочевыводящих путей, что чаще бывает при циститах, уретритах, пиелонефритах, воспалении половых органов.

При почечных протеинуриях белок в мочу попадает непосред­ственно из почек. Почечные протеинурии бывают функциональ­ного и органического происхождения. Функциональные развивают­ся вследствие нарушения проницаемости капилляров почек. Их отмечают у коров в день родов, у новорожденных жеребят в тече-

ние первых трех дней жизни. Органические протеинурии — это ре­зультат поражения паренхимы почек и увеличения проницаемос­ти капилляров клубочков. Ренальную протеинурию наблюдают при гломерулонефритах, нефрозах, застойных явлениях, интокси­кациях, часто при инфекционных заболеваниях. Ренальная и не-ренальная протеинурии нередко комбинируются.

Определение альбумоз. Альбумозы в моче выявляют с помощью биуретовой реакции и пробой с сульфосалициловой кислотой.

Биуретовая реакция. К 3 мл подкисленной мочи добавляют около 1 мл насыщенного раствора хлорида натрия, кипятят, а за­тем горячую пробу фильтруют. К фильтрату добавляют 1/2 объема концентрированного раствора гидроксида натрия и несколько ка­пель сульфата меди. При положительной реакции наблюдают красно-фиолетовое окрашивание.

Проба с сульфосалициловой кислотой. К 2...3 мл исследуемой мочи прибавляют 5...6 капель 20%-го раствора сульфосалициловой кис­лоты. Наличие в моче альбумоз подтверждается появившимся по­мутнением, которое исчезает при подогревании пробирки.

Альбумозы в моче обнаруживают при гнойных, некротических процессах, в послеродовом периоде, при заболеваниях, сопровож­дающихся усиленным клеточным распадом.

Определение сахара. На сахар нужно исследовать свежую мочу. При ее хранении в теплом месте (не в холодильнике) глюкоза раз­лагается под действием ферментов, бактерий, грибов.

Проба Бенедикта. Реактив Бенедикта готовят следующим обра­зом. В мерную колбу на 1000 мл наливают 700 мл дистиллирован­ной воды, добавляют 173 г цитрата натрия и 100 г безводного (или 200 г кристаллического) карбоната натрия. Смесь нагревают до ра­створения всех ее компонентов. Отдельно растворяют 17,3 г суль­фата меди в 100 мл дистиллированной воды. Оба раствора смеши­вают в мерной колбе и после остывания их общий объем доводят дистиллированной водой до 1000 мл.

В пробирку вносят 5 мл реактива и прибавляют 8... 10 капель мочи. Пробу нагревают 2 мин на пламени или 5 мин на кипящей водяной бане. Дают остыть в течение 5...7 мин. При окрашивании содержимого пробирки в синий цвет пробу считают отрицатель­ной. При наличии сахара в моче (более 0,5 г в 100 мл) отмечают зеленое, желтое или красное окрашивание жидкости и осадок на дне пробирки. Причем при содержании в 100 мл мочи от 0,05 до 0,5 г глюкозы цвет пробы зеленый, от 0,5 до 1 г — желто-зеленый, от 1 до 2 г — желтый и больше 2 г — красный.

Проба Ниляндера. Реактив Ниляндера (нитрат висмута — 2 г, сегаетовая соль — 4 г, 10%-й раствор гидроксида натрия — 100 мл) — бесцветный раствор, хорошо сохраняющийся в склянке из темно­го стекла. При продолжительном хранении реактива его качество следует проверять перед постановкой опыта. Для этой цели в про­бирку наливают реактив Ниляндера, разбавленный в 10 раз во-

дой, и нагревают. Если реактив не испорчен, то при кипении жид­кость не должна темнеть.

Проба заключается в следующем: к 3...4 мл реактива Ниляндера добавляют около 2 мл мочи и нагревают смесь в течение 3...4 мин над пламенем спиртовки. При положительной реакции смесь мут­неет и приобретает окраску от коричневой до черной. Чувстви­тельность пробы довольно высокая, она выявляет содержание 0,1 г сахара в 100 мл мочи. Однако при наличии в моче значительного количества мочевой и салициловой кислот, а также гемоглобина проба дает ложноположительную реакцию.

Экспресс-метод. Для экспресс-определения сахара в моче ис­пользуют специальную реактивную бумагу «Глюкотест», или по­лифункциональные полоски. Определить количественное содер­жание сахара в моче можно с помощью орто-толуидинового мето­да (см. Исследование крови).

В норме моча содержит незначительное количество глюкозы, которое не удается обнаружить обычными качественными реак­циями. Если способность почечных канальцев реабсорбировать глюкозу нарушается, то в моче появляется глюкоза — развивается глюкозурия. Последняя может быть физиологической и патологи­ческой. Физиологическая глюкозурия возникает при даче живот­ным кормов, богатых углеводами, иногда в результате испуга, а также при беременности. Патологическую глюкозурию наблюда­ют при сахарном диабете, отравлениях соединениями тяжелых ме­таллов, хлоралгидратом, скипидаром и другими токсическими ве­ществами, при дистрофии печени, воспалительных процессах в головном и спинном мозге.

Определение кетоновых тел. Их обнаруживают с помощью пробы Лестраде. Готовят реактив следующего состава: нитропруссид на­трия — 1 г, сульфат аммония — 20 г, карбонат натрия (безводный) — 20 г. Навески тщательно растирают в фарфоровой ступке, смешива­ют и хранят в хорошо закупоренной стеклянной банке.

На белую кафельную плитку насыпают небольшое количество сухого порошка, который увлажняют 2...3 каплями исследуемой мочи. При наличии кетоновых тел в моче реактив приобретает цвет от розового до темно-фиолетового. Окраска может появиться через 2...3 мин.

В норме моча содержит очень мало кетоновых тел, и они не улавливаются пробой Лестраде. Положительная реакция на кето­новые тела в моче — кетонурия — встречается чаще всего при ке-тозе молочных коров, кетонурии суягных овец, листериозе, про­должительных желудочно-кишечных расстройствах.

Определение крови и кровяных пигментов. Кровь в свежей моче можно легко обнаружить под микроскопом. Кровяные пигмен­ты (гемоглобин и его дериваты — метгемоглобин, сульфгемо-глобин, гемосидерин), а также миоглобин выявляют с помощью специальных проб.

I I Васильев М. Ф. i