Микроскопическое исследование исходного материала

Бактериологическое исследование

Лабораторная диагностика псевдомоноза

Серологическая диагностика

Для целей серодиагностики мелиоидоза применяют пробирочную РА, РСК и РПГА. РА при мелиоидозе малочувствительна и недостаточно специфична. Считается, что титры 1:8-1:160 могут иметь диагностическое значение. Но более достоверны результаты исследования парных сывороток крови, пока­зывающие повышение титра антител. РСК по чувствительности и специфич­ности превосходит РА. В качестве антигена используют водорастворимые экстракты из клеток. Однако в РСК нельзя дифференцировать из-за антиген­ного родства возбудителей мелиоидоза и сапа. Специфичность РПГА опре­деляется характером антигена на эритроцитах. У больных животных и лю­дей, как правило, титры в РПГА составляют 1:320-1:2560.

P. aeruginosa относится к категории условно патогенных бактерий, час­то обнаруживается на слизистых оболочках животных, на фоне сниже­ния резистентности макроорганизма может вызывать септицемии, брон­хопневмонии, абсцессы, маститы, аборты, поражения мочевого тракта, постхирургические осложнения. P. aeruginosa известен как возбудитель псевдомоноза норок. Pseudomonas aeruginosa является аэробной, грам-отрицательной бактерией, относящейся к семейству Pseudomonadaceae, роду Pseudomonas, который объединяет более двадцати видов.
Лабора­торная диагностика основана на результатах бактериологического ис­следования.

Материал для исследования зависит от локализации патологического процесса, вызванного P. aeruginosa, прижизненно это может быть воспалительный экссудат, посмертно — пора­женные участки легких при пневмонии, лимфатические узлы, селезенка, пе­чень, почки и т.д. Материал желательно отбирать непосредственно из очага воспаления, отделяемого, если таковое имеется, а также до начала антибиотикотерапии или после выведения антибиотика из организма.

Из исследуемого материала готовят и микроскопируют мазки, окрашен­ные по Граму. Клетки P. aeruginosa имеют вид прямых или изогнутых грамотрицательных палочек размером 1,5-3x0,5-1,0 мкм, располагающихся одиночно, парами, в виде коротких цепочек. Вирулентные штаммы проду­цируют значительное количество капсулоподобного слизистого вещества. В мазках — отпечатках из тканевого материала клетки P. aeruginosa часто обнаруживаются внутри фагоцитов.

Выделение и идентификация культур P. Aeruginosa. Культивирование. Pseudomonas aeruginosa — аэроб, температурный оптимум — 35-37° С, диапазон 4-42° С, рН — 7,2, к питательным средам неприхотлив. Иссле­дуемый материал высевают на МПА, кровяной МПА или селективную сре­ду, содержащую цетилтриметил аммония бромид (цетримид), на которой другие псевдомонады не растут. Посевы культивируют в аэробных усло­виях при 35-37° С в течение 24 часов.

На МПА P. aeruginosa формирует крупные (2-5 мм), сероватые, с неров­ными, волнистыми распространяющимися плоскими краями, полупрозрач­ные, с гладкой поверхностью и приподнятым центром колонии, часто отли­вающие металлическим блеском, кроме того, могут быть мелкие, шерохова­тые колонии, напоминающие маргаритки. Штаммы, выделенные из респира­торного и мочеполового тракта, могут образовывать слизистые или мукоидные колонии. На кровяном агаре колонии часто окружены зоной β-гемолиза. Культуры P. aeruginosa имеют фруктовый запах, прозрачные среды в про­цессе роста окрашивают в зеленоватый или зеленовато-желтый цвет. Пигментообразование — важный таксономический признак, обнаруживаемый приблизительно у 80% штаммов. Для выявления пигмента исследуемую куль­туру выращивают на средах «А» и «В» в течение суток при 35° С. Пигмент пиоцианин растворим в воде и хлороформе, окрашивает питательные среды в сине-зеленый цвет. Цвет пигмента у культур на специальных средах для выявления псевдомонад варьирует от бледно-голубого до темно-синего или зеленого на среде «А» и ярко-зеленого на среде «В». P. aeruginosa — единственный известный вид бактерий, продуцирующий пиоцианин. В щелочной среде пиоцианин имеет го­лубой цвет, в кислой — розовый. Для выявления этого пигмента культуру выращивают на скошенном агаре, вносят 1-2 мл хлороформа, перемеши­вают, хлороформ при наличии пиоцианина синеет. Окрашенный хлороформ переносят пипеткой в пробирку и вносят 1-2 капли IN HC1, после чего пио­цианин розовеет (кислая среда). Пиоцианин наиболее часто образуют виру­лентные штаммы P.aeruginosa. Пигмент флуоресцеин (пиовердин) — зеле­ный пигмент, растворим в воде, но не хлороформе, флуоресцирует при осве­щении культуры, выращенной на среде «В» в темноте, ультрафиолетовыми лучами с длиной волны 254 мм, его вырабатывают большинство штаммов. Синтез пиовердина стимулирует среда «В», а также культивирование при 25° С. Цвет пигмента пиорубина у культур на среде «А» варьирует от розово­го до темно-каштанового. Пигмент пиомеланин — темно-коричневый, син­тезируют некоторые штаммы P. aeruginosa на среде «В». Часть изолирован­ных штаммов (8-18%) может не образовывать пигменты, что затрудняет идентификацию и требует проведения дополнительных исследований свойств культуры. Спектр пигмен­тов, образуемых P.aeruginosa и другими псевдомонадами, представлен в таб­лице 79. Определение наличия пигмента и его типа — важный этап в иден­тификации P. aeruginosa.

В МПБ рост P.aeruginosa проявляется образованием поверхностной серебристо-белой пленки, что считается характерным признаком. Позднее среда мутнеет (вначале в верхней части столбика среды, далее — в ниж­ней), формируется серовато-белый осадок. За счет пигмента среда приоб­ретает сине-зеленый цвет, который позднее становится бурым.

Морфология клеток P. aeruginosa в культуре. Морфология клеток в культуре идентична таковой в препаратах из па­тологического материала. Клетки подвижные, имеют один, иногда два по­лярных жгутика, способность к слизеобразованию в процессе пассирова­ния на питательных средах быстро утрачивают, спор не образуют. Под­вижность исследуют микроскопически у бульонных культур, выращенных при 18-20° С.