Питательные среды. Биопроба. Проводят в случаях, когда микроскопическое исследование материала дает отрицательные результаты

Биопроба. Проводят в случаях, когда микроскопическое исследование материала дает отрицательные результаты. Заражают молодых кур, кроликов, морских сви­нок, белых мышей, куриные эмбрионы.

Выделение и идентификация культуры возбудителя

B.anserina — микроаэрофил, температурный оптимум 28-30° С, рН 7,3-7,5. Посевы производят из крови, печени, селезенки, желчного пузыря, яичников. Особенно эффективны посевы крови, взятой у пти­цы на стадии лихорадки. Для культивирования применяют стериль­ную сыворотку крови, яичный белок с добавлением сыворотки кро­ви, среду Терских. Для выделения культур возбудителя применяют также 7-10-дневные куриные эмбрионы, которым вводят 0,2 мл ма­териала (кровь, взвесь ткани паренхиматозных органов) в хориоалантоисную полость. В положительных случаях эмбрионы погиба­ют через 6-8 суток, у них выявляют воспалительные и дегенератив­ные изменения.

Рост возбудителя на плотных и жидких питательных средах скудный, для поддержания культур пересевы проводят с интервалом 5-8 суток. На жидких средах рост B.anserina можно подтвердить только путем микроско­пии препаратов из культуры.

Для длительного хранения штаммов боррелий используют метод глубокого замораживания в жидком азоте. С целью заморажи­вания берут свежеполученную цитратную кровь, содержащую около 6 млрд. микробных клеток в 1 мл и замораживают в жидком азоте. Бор­релий сохраняют жизнеспособность и вирулентность в течение года хранения. Боррелий можно хранить при 2-6° С в стерильной цитрированной или гепаринизорованной крови, однако в этом случае инфекционные свойства материала постепенно снижа­ются.

Кровь и кусочки паренхиматозных органов объединяют, измельча­ют в ступке, разводят физиологическим раствором 1:10-1:20 и вводят курам внутримышечно по 2 мл или внутрибрюшинно, соответственно по 1-2,1 и 0,5 мл. При использовании для заражения свежей крови от больной птицы ее вводят животным внутривенно. О результатах био­пробы судят по результатам микроскопического исследования крови животных в период с 48 до 72 часов после заражения (позднее борре­лий могут исчезнуть). Зараженные птицы могут погибать, но не всегда. Для обнаружения возбудителя у зараженной птицы, кроме, того исполь­зуют РИФ и РДП.

Сыворотка крови кролика или лошади. Стерильную, инактивированную (58-60° С, 30 минут) сыворотку раз­ливают по пробиркам, вносят небольшое количество стерильного вазели­нового масла.

Свернутый куриный белок с сывороткой крови. Стерильно взятый куриный белок разливают по стерильным пробиркам и свертывают в скошенном состоянии в водяной бане. Затем в каждую про­бирку вносят по 5 мл инактивированной сыворотки крови, разведенной сте­рильным физиологическим раствором 1:5 (сыворотка кролика), 1:50 (сыво­ротка лошади).

Среда Терских. См. «Лептоспироз».