Лабораторная диагностика инфекционного гастроэнтерита свиней

Дифференциальная диагностика. КЧС необходимо отличать от африканской чумы, пастереллеза, сальмонеллеза, рожи, БА, ВД-БС, парагриппа и гриппа. При африканской чуме ярче выражен геморрагический диатез, увеличена и размягчена селезенка, полнокровие и кровоизлияния в почках. Чаще поражаются, имея вид кровяных сгустков, портальные, почечные и брыжеечные лимфоуз­лы. Сильно выражен отек интерстициальной ткани легких, скопление в грудной полости кровянистой жидкости. Редко отмечают инфаркт селезенки, постоянно - тотальный распад лимфоцитов и тканей лимфоидных органов. Для дифференциации ставят тест перекрестного иммунитета, тест гемадсорбции и РИФ.

Пастереллез, как правило, не принимает характера эпизоотии, поражает преимущест­венно взрослых животных. Для него характерны отек подкожной клетчатки подчелюстного пространства, распространяющийся на шею и глотку, серозный лимфаденит, фибринозно-некротизирующая пневмония, слабо выраженный геморрагический диатез. Кроме того, об­наруживают возбудителя при бактериологическом и биологическом исследованиях.

Рожа обычно возникает в летний период года и характеризуется застойными явлениями кожи (рожистая эритема) и во внутренних органах, увеличением селезенки, гломерулонефритом и катаральным гастроэнтеритом. Рожу свиней диагностируют выделением возбудите­ля. Не исключено одновременное течение чумы и рожи. В этом случае диагноз ставят на ос­новании биологической пробы на чуму и бактериологического исследования на рожу.

Сальмонеллез наблюдают спорадически и энзоотически среди молодняка 1-5-мес воз­раста. Характеризуется слабым геморрагическим диатезом, развитием в толстом кишечнике плоских рыхлых струпьев и язв, а не "бутонов", очаговыми некрозами печени. Результаты бактериологических исследований являются также основанием для дифференциации КЧС.

Грипп и парагрипп свиней исключаются вирусологическим исследованием материала, взятого из верхних дыхательных путей (наличие ГА вируссодержащего материала в первых пассажах на КЭ, гемадсорбции в культуре ткани, цитоплазматических включений при риноцитоскопии).

Болезнь Ауески чаще наблюдается среди поросят. Проводят вирусологиче­ские исследования и биопробу на кроликах.

Вирусную диарею у инфицированных свиней устанавливают с помощью ПЦР, поскольку большой неструктурный протеин пестивирусов
125 кД высоко консервативен, а мажорный протеин конверта gm.53 четко различается у ВКЧС и диареи КРС.

Инфекционный гастроэнтерит свиней (ИГС) (трансмиссивный гастроэнтерит свиней -ТГС) - остро протекающая высококонтагиозная болезнь, главным образом поросят до 3-мес возраста.

Проявляется рвотой, тяжелой диареей и высокой смертностью (часто до 100%) среди поросят до 2-нед возраста. ИГС первыми описали Доил и Хитчингс (США) в 1946г.

Распространенность в большинстве европейских стран составляет около 100%.

В естественных условиях к вирусу восприимчивы свиньи и собаки. Собаки могут быть носителями вируса, инаппарантным источником для восприимчивых свиней.

Вирус инфекционного гастроэнтерита свиней (ВИГС) – сем. Coronaviridae, род Coronavirus. ВИГС впервые выделил и описал японский исследователь Тайима (1970г).

Штаммы вируса, выделенные от животных в разных странах, серологически идентичны, хотя в последние годы появились варианты.

ВИГС имеет 1 серотип, не имеет связи с вирусом энзоотической диареи свиней.

Существует иммунологическое различие между кишечным и культуральным ВИГС. В 1977г установлено АГ родство ВИГС с вирусом инфекционного перитонита кошек (ВИПК), а также коронавирусом собак (КВС).

Вирус ИГС обладает выраженной АГ активностью и индуцирует синтез ВНА.ВИГС агглютинируетэритроциты цыплят, морских свинок и КРС.

Для выращивания ВИГС применяют: первичные КК тестикул, кожи, легких, щитовидной железы, тощей, подвздошной кишок, эпителия слизистой оболочки носовой полости и перевиваемые клетки тестикул поросенка (ЦПД после предварительной адаптации, синцитий, бляшки в КК щитовидной железы свиньи и в перевиваемой линии клеток семенников свиней); органные культуры пищевода; суспензионную культуру линии клеток почки поросенка ППК-66б. Для выделения вируса наиболее пригодны культура клеток щитовидной железы свиньи и перевиваемая линия РК-15.

Диагноз ставят на основании эпизоотологических данных, симптомов болезни и результатов лабораторных исследований. Лабораторная диагностика включает изоляцию вируса из органов погибших поросят, идентификацию его в РН и РИФ в культуре клеток и выявление специфических AT в сыворотках крови больных и переболевших животных. В качестве экс­пресс-диагностики используют РИФ для обнаружения вирусного АГ в органах животных.

Выделение вируса. Для исследования в лабораторию направляют тонкий кишечник (тощую и подвздошную кишки с содержимым) и мезентериальные лимфоузлы от поросят в начальной стадии проявления клинических признаков болезни (первые часы диа­реи) Кроме того, целесообразен отбор органов и тканей (кусочков лёгкого, печени, селезёнки, почек, головного мозга). Патологический материал от трупов, пролежавших более 2 ч иле гибели, для исследования не пригоден. Материал необходимо брать от 8-9 больных поросят 3-5 поражённых помётов (по 2-3 поросёнка из помёта). От каждого поросёнка берут пробы массой 10 г. Отрезок кишки длиной 10-12 см перевязывают и берут с содержимым. Пробы патматериала доставляют в лабораторию в плотно закрытых стеклянных флаконах, помещенных в сосуд Дъюара с жидким азотом или в термос с сухим льдом. Для серологи­ческих исследований направляют парные сыворотки крови от свиноматок, в помётах кото­рых болеют новорождённые поросята, взятые с интервалом в 21 день. Вируссодержащий материал сохраняют в активном состоянии в течение нескольких лет при температурах ми­нус 20:-70°С. При -28°С вирус остаётся активным около 3,5 лет. При 4°С он может сохра­ниться в течение 1-го мес. В связи с фоточувствительностью вируса все вируссодержащие материалы следует защищать от действия света. С целью длительного сохранения патологи­ческий материал (фрагменты кишечника) можно замораживать до -30:-70°С и использовать по мере надобности в течение 2-3,5 лет. Для вирусологических исследований оттаиванию подвергают лишь необходимую часть патологического материала. Исходный материал стараются постоянно держать в глубоко замороженном состоянии. Упаковка должна надёжно предохранять материал от какого-либо воздействия на него жидкого азота. Для выделения вируса из органов поросят (отдельно паренхиматозных органов и кишечника) готовят 10%-ную суспензию на р-ре Хенкса по общепринятой методике и после проверки её на стериль­ность используют для заражения чувствительной системы (культура клеток, поросята).

Заражение культуры клеток. Выделение вируса проводят на первичных и перевивае­мых линиях клеток поросят (почек, щитовидной и слюнных желез, тестикул). Материалом каждой пробы инокулируют не менее 4-8 пробирок с культурой клеток. Для исследования методом ИФ заражают культуру клеток, выращенную на стеклышках. Её просматривают ежедневно в течение 5-7 сут. При отсутствии ЦПД в первом пассаже проводят 5-7 последо­вательных пассажей. Обычно ЦПД вируса наступает через 2-7 пассажей и характеризуется набуханием, утолщением с последующим укорочением и округлением клеток до полного разрушения монослоя. Идентификацию выделенного вируса проводят в РИФ и РН.

Заражение восприимчивых животных. В связи с наличием большого количества штаммов ВИГС, не обладающих ЦПД, биопроба на восприимчивых поросятах - надежный метод выделения вируса. У зараженных животных вирус сравнительно легко удается выде­лить из фекалий, однако в наивысших концентрациях он содержится в слизистых оболочках тонкого кишечника, особенно двенадцатиперстной и тощей кишок. Уже через 24-72 ч после клинического проявления болезни титры вируса в этих тканях достигают 10⁶-10⁷ ИД₅₀/г. По­этому, если необходимо выделить вирус, поросят убивают через 24 ч после появления диа­реи и полученные от них материалы (содержимое и соскобы слизистой тонкого кишечника) подвергают вирусологическому исследованию. В крови и почках поросят вирус удается об­наружить через 24-48 ч после заражения, но титры его обычно низкие - 10¹-10² ИД₅оь лишь изредка концентрация вируса в почечной ткани может достигать 10⁵-10⁶ ИД₅₀/_г.

У новорожденных поросят, зараженных интраназально, через 2 ч после заражения вирус может быть обнаружен в ткани легких (титры до 10 ИД₅₀/г), а у поросят, зараженных ин­траназально в 6-дн возрасте, вирус может быть обнаружен в слизистой оболочке носа (титры до 10 ИД₅₀/г). Для подтверждения диагноза важно также исследование в РН парных сывороток, 1-ую из них берут на 3-5-й день после начала болезни, а 2-ую (от выживших жи­вотных) - через 1-2 нед.

Для биопробы можно использовать супоросных свиноматок за 3-5 дн до опороса. Сви­номатку заражают 10%-ной суспензией, приготовленной из пораженных стенок тонкого ки­шечника вынужденно убитых больных поросят, или вируссодержащей культуральной жид­костью. Исследуемый материал вводят per os в количестве 10 мл. Контролем служит 2-я су­поросная свиноматка. Биопробу считают положительной, если через 24 ч (реже через 48ч) поросята, родившиеся от зараженной свиноматки, заболевают с клиникой ИГС. В сомни­тельных случаях проводят исследования органов от вынужденно убитых в атональном со­стоянии поросят подопытной группы на наличие вируса методами РИФ и РН.