Лабораторная диагностика реовирусная инфекция овец

Таблица 109 – Дифференциальная диагностика оспы овец

Таблица 108 – Результаты гистологических исследований кожи свиньи, больной оспой

Индикация и идентификация вируса

Вирусоскопия. Свежую папулу протирают ватой, смоченной спиртом, срезают (лучше бритвой) и поверхностью среза делают несколько тонких мазков на предметных стеклах. Мазки подсушивают на воздухе и окрашивают методом серебрения (по Морозову). При ви­русоскопических исследованиях пораженных участков кожи обнаруживают характерное расположение вирионов в виде россыпи. Однако отсутствие вирусных частиц в препарате еще не исключает оспу.

ЭМ. ЭМ пораженных участков кожи больных оспой поросят и обнаружение характер­ных вирусных частиц - один из методов экспресс-диагностики оспы. Для этого требуется всего около 30 мин.

Обнаружение специфических телец-включений. Развитие оспенных поражений в коже больных хорошо прослежено гистологическими исследованиями, результаты которых приведены в табл.108.

Обозначения: (+, ++, +++) - выраженность реакции

(-) - отсутствие реакции или внутриклеточных включений

Диагноз на оспу считают положительным при наличии в гистологических препаратах ацидофильных включений и внутриядерных вакуолей в гиперплазированных кератиноцитах эпидермиса кожи. Цитоплазматические включения при ОС относятся к группе Б, т. е. к включениям, материал которых участвует в репродукции вируса.

Серологическая идентификация. Не разработана. Однако при необходимости воз­можна постановка РДП и более чувствительного теста - противоточного электрофореза.

Дифференциальная диагностика. Болезнь у свиней могут вызвать вирусы ОС, оспы коров, осповакцины и, по данным некоторых исследователей, оспы кур. Дифференциацию возбудителя, вызвавшего оспу у свиней, проводят на КЭ, культурах клеток органов и тканей кроликов или поросятах. Для этого используют 2-х поросят, переболевших оспой (подопыт­ные), и 2-х здоровых (контрольные). Им втирают в скарифицированную кожу по 2 капли растворенной сухой осповакцины. Развитие оспенных поражений у подопытных и кон­трольных животных через 5-8 дн после нанесения вируса осповакцины указывает на нали­чие в хозяйстве оспы, вызванной натуральным ВОС. Отсутствие их у подопытных живот­ных при положительной поствакцинальной реакции у контрольных свидетельствует о нали­чии у свиней оспы коров или осповакцины.

Дифференциацию возбудителей, выделенных от больных свиней с клинической карти­ной оспы, проводят на основании данных, приведенных в табл. 109. Более простым спо­собом дифференцирования этих болезней является заражение кролика путем введения ис­следуемого материала в скарифицированную кожу. ВОС не вызывает у этих животных кож­ной реакции, в то время как вирусы осповакцины и оспы коров ее вызывают. Оба последних вируса можно выделить также путем заражения КЭ и культур клеток. Наличие телец-включений вдоль центральной "просветленной" околоядерной зоны в пораженных эпители­альных клетках является патогномоничным для ВОС.

Оспу у свиней следует дифференцировать от экзантем, появляющихся при авитамино­зах, аллергии и нарушении обмена веществ, энзоотической бронхопневмонии, стрептокок­ковом сепсисе, паратифе, чесотке, лишае, ВБС и везикулярной экзантеме. При экзантемах незаразной этиологии обычно не бывает лихорадки и биопроба отрицательная. Экзантема при чесотке, паратифе и других болезнях протекает без стадийного развития, как при оспе, а из патологического материала выделяют соответствующих возбудителей.

Обозначения: + наличие репродукции на ХАО; 0 - отсутствие таковой. ИН - инкубационный период; * - при отсут­ствии осложнений; ДБ - длительность болезни; в/к - внутрикожное заражение; в/в - внутривенное заражение.

Примечание. Свиньи оспой от овец и коз обычно не заражаются. Среди указанных вирусов перекрестный им­мунитет образуется только между вирусами оспы коров и осповакцины; ВН ОС - вирус натуральной оспы свиней.

Инфекционная катаральная лихорадка овец ("синий язык" КЛО) - вирусная трансмис­сивная инфекция, передающаяся кровососущими насекомыми из рода Сulicoides, характери­зующаяся лихорадочным состоянием, воспалительно-некротическими поражениями ротовой полости, особенно языка, пищеварительного тракта, эпителия венчика и основы кожи ко­пыт, а также дегенеративными изменениями скелетных мышц. Регистрируется во многих странах. В Российской Федерации с 1993 г. не­благополучными являются не­которые районы Бурятии.

Диагноз ставят на основании эпизоотологических данных, симптомов болезни, патоморфологических изменений и результатов лабораторных исследований. Для окончательно­го диагноза проводят выделение вируса, его идентификацию и ставят биопробу. Для выде­ления вируса более чувствительны 10-11-дн КЭ, заражаемые на ХАО или внутривенно про­бами испытуемой крови, обработанной ультразвуком. Выделенный вирус идентифицируют в РН, применяя типоспецифические сыворотки. Для быстрого обнаружения вируса рекомен­дуется ИФ в культуре клеток. Показано, что РН по бляшкам более чувствительна, чем РСК и РДП. С помощью РСК удается выявлять АТ в сыворотке крови овец и КРС.

Для выделения вируса КЛО проводят иммобилизацию Сulicoides триэтиламином, которым пропитывают специальные аппликаторы. Через 2-3 мин после воздействия паров пре­парата обездвиженных насекомых микроскопируют и отбирают самок, которых замораживают в жидком азоте. Перед началом проведения вирусологического исследования насекомых размораживают и помещают в среду Игла МЕМ с 10% фетальной сыворотки и антибиотиками, обрабатывают ультразвуком; суспензию осветляют центрифугированием. Для выделения вируса КЛО используют перевиваемую линию клеток С 6/36, полученную из личинки Аedes оlbapietus. Эта линия высоко чувствительна, пригодна для первичной изоляции вируса КЛО из патологического материала. Линию клеток выращивают при температуре 28°С, создавая оптимальные условия для функционирования РНК-полимеразы вируса. Поскольку в этих условиях ЦПД не проявляется, то его наличие в зараженной суспензии клеток насекомых определяют с помощью ИФ и ИФА. Разработан укороченный метод первичной обработки патологического материла (пулов насекомых). Исследование его в культуре клеток показало высокую чувствительность и пригодность для полевых обследований популяций насекомых на инфицированность вирусом КЛО.

Установлена высокая чувствительность метода выделения вируса в перевиваемой линии культуры клеток ПСКГ в сочетании с методом ИФА. Последний рекомендован для вы­явления АГ вируса блутанга в инфицированных культурах клеток и в суспензии инфициро­ванных комаров Сulicoides variipennis. Высокая чувствительность ИФА позволяет обнару­жить одного инфицированного мокреца в смеси с 92 неинфицированными насекомыми. Разработан непрямой вариант ИФА для серологической диагностики блутанга. Оконча­тельная диагностика КЛО, которая часто протекает субклинически у домашних и диких жи­вотных, может быть проведена только лабораторными методами выделения вируса, выявле­ния АГ, нуклеиновых кислот вируса и АТ. Вирус выделяют из компонентов крови, в основ­ном из эритроцитов, отобранных у животных во время лихорадочной реакции. Исследуемый материал вводят в КЭ и проводят пассаж в культуре клеток (ВНК -21, Vero).

Для идентификации вирусных АГ используют ИФ, РН, ИЭМ с применением монАТ и ИФА. Дня выявления нуклеиновых кислот делают гибридизационный анализ и ПЦР. АТ обнаруживают в РДП в агарозе и в конкурентном ИФА. Последняя реакция с использовани­ем вирусепецифических монАТ является более чувствительным и специфичным методом обнаружения АТ к КЛО. РН в культуре клеток служит наиболее общепринятым методом выявления типоспецифических АТ. Во ВНИИЗЖ также получены монАТ для постанов­ки ингибирования ТФ ИФА.

КЛО необходимо дифференцировать от ящура, контагиозного пустулезного дерматита (эктимы), оспы, везикулярного стоматита, злокачественной катаральной лихорадки, сердеч­ной водянки, болезни Найроби, лихорадки долины Рифт и некробактериоза.