2014-02-10
1294
Определение количественного содержания биологически активных веществ, в частности гормонов, в биологических средах организма является важной составной частью клинического обследования больного. Весовая концентрация большинства таких веществ в организме чрезвычайно мала, что являлось практически непреодолимым препятствием для разработки и внедрения эффективных химических способов их определения. Биологические методы отличались низкой чувствительностью, плохой воспроизводимостью с небольшой точностью. Новые возможности открылись в 1959 году благодаря работам R.Yalov и S.Berson, которые показали, что небольшие количества инсулина-131I, связанного с антителами к инсулину, вытесняются в порядке конкуренции немеченым инсулином из комплекса антиген-антитело. Это открытие положило начало новому направлению в радионуклидной диагностике. Наличие радиоактивного нуклида в комплексе антиген-антитело дало возможность точного количественного измерения конечного результата путем радиометрии. Широкое распространение этого метода позволило решить проблему количественного определения гормонов и других веществ с непревзойденной чувствительностью, точностью и специфичностью. Этому способствовало и то обстоятельство, что в противоположность радионуклидным методам все исследование выполняется без введения больному радиоактивного препарата, т.е. без облучения пациента. Достаточно взять у больного несколько миллилитров крови или другого биосубстрата и выполнить все исследования in vitro.
|
|
|
Принципиальной основой методик радионуклидных исследований in vitro является конкурентное связывание искомых (немеченых и идентичных искусственно меченых) веществ или соединений со специфически связывающими системами.
Специфическая связывающая система (именуемая “биндер”, т.е. связывающий) вступает в равноправное взаимодействие как с исследуемым веществом (именуемым “лигандом”, т.е. связываемым), так и с его аналогом, меченым радиоактивным нуклидом, связываясь с ними в количествах, пропорциональных их исходным концентрациям. Таким образом, чем больше содержание исследуемого вещества в данной пробе, тем меньшая часть его меченого аналога свяжется со специфической связывающей системой и тем большая часть остается несвязанной. Чаще всего комплекс лиганд + биндер выпадает в осадок, а не связанная часть меченого аналога остается в надосадочной жидкости.
При этом количество искомого вещества в различных пробах варьирует, а количество меченого аналога и специфической связывающей системы постоянно. Кроме того, обычно меченого лиганда больше, чем биндера.
|
|
|
Отделив комплекс меченый лиганд+биндер от несвязавшегося лиганда, можно измерить связавшуюся величину активности, которая, как уже давно показано, обратно пропорциональна содержанию искомого вещества. Одновременно в тех же условиях проводится серия анализов известных концентраций искомого вещества (так называемые стандартные разведения), которые позволяют построить колибровочную кривую, отражающую изменения связанной активности в зависимости от концентрации немеченого лиганда (искомого вещества).
В настоящее время методики РИА разработаны для более чем 400 соединений различной химической природы и применяется в следующих областях медицины:
1) в эндокринологии для диагностики сахарного диабета, патологии гипофизарно-надпочечниковой и тиреоидной систем, выявления механизмов других эндокринно-обменных нарушений;
2) в онкологии для ранней диагностики злокачественных опухолей и контроля за эффективностью лечения путем определения концентрации альфа-фетопротеина, раковоэмбрионального антигена, а также более специфических туморальных маркеров;
3) в кардиологии для диагностики инфаркта миокарда путем определения концентрации миоглобина, контроля лечения препаратами дигоксин, дигитоксин;
4) в педиатрии для определения причин нарушения развития у детей и подростков (определение соматотропного гормона, тиреотропного гормона гипофиза);
5) в акушерстве и гинекологии для контроля за развитием плода путем определения концентрации эстрола, прогестерона, в диагностике гинекологических заболеваний и выявления причин бесплодия женщин (определение лютеинизирующего и фолликулостимулирующего гормонов);
6) в аллергологии для определения концентрации иммуноглобулинов Е и специфических реагинов;
7) в токсикологии для измерения концентрации в крови лекарственных веществ и токсинов.
