Качественный анализ

Для качественного определения иридоидов в ЛРС часто используют реактив Трим-Хилла.

Реактив Трим-Хилла: смесь кислот уксусной ледяной,

хлористоводородной концентрированной,

0,2% -ного водного раствора меди сульфата (20:1:2).

К 1 мл спиртового извлечения из ЛРС прибавляют 0,5 мл реактива Трим-Хилла. Смесь нагревают на водяной бане 1-2 мин. При взаимодействии с этим реактивом иридоиды ряда аукубина дают голубое или синее окрашивание. С помощью этого реактива могут быть обнаружены асперулозид, гарпагид, монотропеин, тевирикозид.

Несмотря на то, что эта реакция является общепринятой, некоторые иридоиды (например, вербеналин, логанин, плюмирид) ею не выявляются. В аналитической практике находит применение реактив Шталя, с которым реагируют большинство веществ иридоидной природы. Иридоиды группы аукубина с этим реативом дают синюю или голубую окраску.

Реактив Шталя: n-диметиламинобензальдегид – 1г,

концентрированная хлористоводородная

кислота – 5 мл,

этанол – до 100 мл.

Реактив Бэкон-Эдельмана: бензидин – 0,5 г,

трихлоруксусная кислота – 10 г,

этанол – до 100 мл.

Иридоиды с этим реактивом окрашиваются от лимонно-желтого до коричневого цвета.

С вербеналином – фиолетовая окраска,

с аукубином – лимонно-жёлтая,

с каталполом – коричневая окраска в видимом свете с интенсивной жёлтой флуоресценцией в УФ - свете.

Реактив Година: ванилин – 1 г,

3% водный раствор хлорной кислоты – 50 мл,

этанол – до 100 мл.

Логанин с этим реактивом даёт окрашивание от красного до фиолетового.

Обнаружение аукубина: кусочек растительного материала помещают на фильтровальную бумагу, смачивают каплей реактива Шталя, через 2-3 мин сырьё снимают с бумаги и место с реактивом прогревают струёй горячего воздуха (90-100°С). При наличии аукубина наблюдают появление на бумаге голубого пятна (при наличии в сырье проазуленов образуется пятно зеленого цвета).

ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ

Для более достоверного суждения о содержании иридоидов используют бумажную (БХ) и тонкослойную (ТСХ) хроматографии. Системы растворителей

для БХ: Н-БУТАНОЛ - УКС. КИСЛОТА - Н2О (4:1:5);

Н-БУТАНОЛ - МЕТАНОЛ - Н2О (4:1:5);

ПРОПАНОЛ - Н2О (4:1);

для ТСХ: ЭТАНОЛ - ХЛОРОФОРМ (1:1);

ЭТИЛАЦЕТАТ-МЕТАНОЛ и др. (4:1);

Для обнаружения иридоидов на хроматограммах используют 3% спиртовые растворы серной, соляной, трихлоруксусной кислот, реактивы Трим-Хилла, Шталя, Бэкон-Эдельмана и др.

После проявления хроматограммы выдерживают 5 - 10 мин в сушильном шкафу при температуре 110°С.

Иридоиды аукубинового ряда проявляются реактивами Трим-Хилла и Шталя в виде синих, зелёных и фиолетовых пятен.