Работа на микротоме

Для получения гистологических срезов применяют специальные приборы, называемые микротомами. Полученный ранее парафиновый блок наклеивают на специальную деревянную колодку, срезают лишний парафин и устанавливают в микротом. Микротомы позволяют получить срезы разной толщины; хорошей для светомикроскопического среза является толщина 3-4 мкм.

Полученные срезы при помощи смеси белка с глицерином прикрепляют к предметным стеклам. Вся дальнейшая работа связана с подготовкой срезов к окрашиванию. Целью окрашивания является более отчетливое выявление компонентов клеток и тканей.

Предметные стекла.

Предметные стекла должны имеют толщину 1,0 – 1,2 мм. Толщина стекла порядка 1 мм примерно соответствует длине световой волны, что обеспечивает низкие интерференцию и дифракцию волн, слабое отклонение светового пучка. Это способствует получению на подобных стеклах препаратов высокого оптического качества. Кроме того, постоянство толщины стекла по всей длине препарата снижает до минимума необходимость подстройки фокусного расстояния микроскопа, что особенно важно при микроскопии на иммерсионном объективе. Кроме того, предметные стекла не должны быть окрашены. Имеющее окраску стекло искажает оттенки окраски клеток и клеточных элементов в препарате, что особенно не желательно, когда тонкие оттенки цветов являются самым существенным фактором идентификации и диагностики.

Предметные стекла отличаются по состоянию бокового ребра – резанные или с зашлифованным краем. Стекла с зашлифованным краем используют при микроскопировании объектов, при котором блики на срезанном боковом ребре могут помешать идентификации объекта. Также стекла отличаются наличием или отсутствием матового окошка на поверхности стекла, использующегося для маркировки препарата. Размер окошка – 26 х 20 мм.

Депарафинирование срезов.

Парафиновые срезы перед окрашиванием освобождают от парафина с помощью любого его растворителя, как правило, это толуол. Депарафинирование осуществляют по следующей схеме: толуол (1 смена), толуол (2 смена), 100° спирт (1 смена), 100° спирт (2 смена), 96° спирт, 70° спирт, дистиллированная вода.

Окрашивание срезов.

Депарафинизированные срезы готовы к окрашиванию. При окраске водными красителями срезы переносят в краситель из водной среды, а при окраске спиртовыми – из соответствующего раствора спирта. Более подробно о красителях см. далее.