Методические указания и краткие теоретические сведения

Изучение морфологии и строения клеток микроорганизмов, величина которая измеряется в большинстве случаев микрометрами (1мкм = 0,001мм = 10^-3мм), возможно только с помощью специальных приборов – микроскопов, обеспечивающих увеличение исследуемых объектов в сотни (световая микроскопия) и десятки тысяч (электронная микроскопия) раз.

Приготовление препаратов живых и инактивированных микроорганизмов.

Перед началом работы зажигают спиртовку. Пробирку с культурой (не открывая пробку) помещают между большим и указательным пальцами левой руки, поддерживая ее средним пальцем так, чтобы она находилась в наклонном положении. В правую руку берут держатель бактериологической петли, прокаливают петлю в пламени спиртовки. Обжигают в пламени спиртовки и часть держателя, примыкающего к петле. Держатель берут при помощи большого и указательного пальца правой руки и поддерживают средним пальцем как писчее перо. Затем мизинцем правой руки плотно захватывают ватную пробку и, зажав ее между мизинцем и ладонью, вращательным движением вытаскивают пробку из пробирки и держат ее таким образом, чтобы она внутренней поверхностью не касалась окружающих предметов. После этого обжигают края пробирки в пламени спиртовки. Прокаленную петлю вводят в зоне пламени спиртовки в пробирку, дают ей остыть, прикасаясь к внутренней поверхности стенки пробки, и берут немного микробной массы или каплю жидкости. После этого вновь обжигают края пробирки и пробку, закрывают пробирку пробкой. Если пробка загорится, ее быстрым движением заталкивают в пробирку и тушат, закрыв рукой. Взятый петлей материал используют для приготовления препарата или посева.После этого снова обжигают петлю в пламени спиртовки для уничтожения оставшихся в ней микроорганизмов.

Для определения формы микробов, способности их к спорообразованию и подвижности исследования бактериальных клеток производят в живом и инактивированном состоянии. С этой целью готовят препараты.

Для наблюдения подвижности микроорганизмов готовят препараты: раздавленную и висячую капли.

Раздавленная капля. На чистое предметное стекло наносят небольшую каплю водопроводной воды. Дистиллированную воду брать не рекомендуется, так как в ней отсутствует необходимая для микробов концентрация солей, что может вызвать изменение формы клеток, потерю ими способности к движению и т.д.. В каплю воды вносят иглой небольшое количество исследуемых микробов, тщательно размешивают и полученную слегка опалесцирующую суспензию покрывают покровным стеклом.

Висячая капля. Наносят каплю суспензии микробов петлей на покровное стекло, перевертывают его так, чтобы капля висела на нижней стороне стекла, и накладывают его на предметное стекло с углублением посередине. Капля должна свободно висеть в углублении предметного стекла, не касаясь его краев и дна. Края углубления предметного стекла предварительно необходимо смазать вазелином для герметичного заключения капли во влажной камере.

Прижизненная окраска. При работе с раздавленной каплей для лучшей видимости микробов жидкость можно слегка подкрасить, введя под покровное стекло небольшую каплю раствора метиленовой сини или нейтрального красного. В результате бактерии приобретают синюю или красную окраску, лучше видны и поэтому легче определить их форму.

Фиксацией и окраской препаратов пользуются в тех случаях, когда необходимо рассмотреть некоторые детали строения бактериальных клеток (капсулы, споры, включения, жгутики), вести подсчет микробов и т.п.

Для приготовления фиксированного и окрашенного препарата на сухое обезжиренное предметное стекло стерильной пипеткой наносят каплю стерильной воды. Стерильной петлей берут небольшое количество бактериальной массы и вносят ее в каплю воды на предметное стекло, перемешивая до помутнения капли. После этого бактериологической петлей равномерно распределяют бактериальную взвесь по поверхности предметного стекла тонким слоем. Полученный мазок высушивают при комнатной температуре, а затем сухой препарат проводят 3-4 раза над пламенем спиртовки мазком вверх для фиксации бактериологического материала. При фиксации микроорганизмы убиваются, происходит их прикрепление к стеклу и повышается их восприимчивость к красителям.

Фиксированный мазок кладут на стеклянный мостик над ванночкой и на него наливают краситель. После 1-2-минутной экспозиции краску сливают, препарат осторожно промывают водой до тех пор, пока стекающая вода не становится бесцветной. После высушивания при комнатной температуре препарат готов к микроскопированию.