Основы иммуноферментного анализа

Сущность ИФА, относящегося к иммунохимическим методам, заключается в специфическом взаимодействии антигена и антитела с последующим присоединением к образующемуся комплексу коньюгата – анти-антитела, меченного ферментом. Фермент вызывает превращение неокрашенного субстрата (хромогена) в окрашенный продукт, выявляемый фотометрически. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации комплекса антиген-антитело. В качестве иммобилизованного на поверхности анти-антитела (антивидового иммуноглобулина) фермента чаще используются пероксидазы. При разложении ими Н₂О₂ выделяется кислород, вызывающий окисление хромогена в окрашенный продукт.

Процедура твердофазного ИФА (ELISA - еnzyme-linked immunosorbent assay) включает следующие этапы:

1) специфическое связывание антигена (2), пришитого к твердой фазе (1- планшета) с имеющимся в сыворотке антителом(3);

2) образование коньюгата – присоединение анти-антител, меченных ферментом (4);