Работа №2. Определение активности уропепсина

Метод основан на способности пепсина в определенных условиях расщеплять белковую молекулу гемоглобина с освобождением тирозина и триптофана. По концентрации последних судят о пептической активности желудочного сока или мочи. Около 1% пепсиногена, вырабатываемого клетками слизистой оболочки желудка, поступает в кровь и выводится почками с мочой в виде уропепсиногена.

Техника проведения работы. Определение уропепсина.

Из суточного количества мочи отбирают 20 мл, помещают в градуированный цилиндр, подкисляют раствором соляной кислоты до pH 1,5 и доводят дистиллированной водой до 25 мл. Таким же путем доводят раствор гемоглобина до pH 1,5. В пробирку отмеривают 1 мл подкисленной мочи, добавляют 5 мл раствора гемоглобина, перемешивают и выдерживают на водяной бане при 37* в течение 30 мин. Затем добавляют 10 мл 5% раствора ТХУ, перемешивают, фильтруют и в фильтрате определяют тирозин. Для этого к 2 мл фильтрата добавляют 5 мл дистиллированной воды, 8 мл раствора щелочи и 3 мл реактива Фолина, предварительно разведенного водой в 3 раза. После добавления последнего развивается голубая окраска. Через 30 мин на ФЭКе определяют оптическую плотность при длине волны 580 нм. Опыт сравнивают с контролем, в контроле моча заменяется дистиллированной водой. Расчет содержания пепсиногена в суточном количестве мочи производят по формуле:

П сут =20×Д×V×X (Ед/24часа),

где Д- оптическая плотность опытного раствора; X- количество тирозина в мг, которое определено по калибровочной кривой; V- объем мочи за 24 часа.

Определение пепсина в желудочном соке производят аналогичным способом, с той лишь разницей, что для исследования берут 5 мл желудочного сока. Расчет производят на 100 мл желудочного сока.

Эталоны ответов на тесты

Вид 1. 1.1. – б, е; 1.2 - б.

Вид 2. 2.1. 1- б, в, г; 2- а, д, ж; 3-е; 2.2. 1- в, г; 2 – а, б, д.

Вид 3. 3.1. 1 –а, 2 – б;3.2. 4 – а, 1 – б, 2,3 – в.

Вид 4. 4.1. С (+, -, -); 4.2 Д (-, +, -).

Эталоны ответов на ситуационные задачи

Задача 1. Острый панкреатит. Аутолиз (самопереваривание) ткани поджелудочной железы протеолитическими ферментами.

Задача 2. 1) пепсин расщепит химотрипсин;

2) химотрипсин расщепит пепсин;

3) ничего не произойдет.

Задача 3. 100г белка содержат 15 г N

60 г белка содержат: 60×15/100=9 г N

С мочой выделяется 14 г азота, поступает с пищей 9 г азота. Отрицательный азотистый баланс.